华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2012年
5期
33-37
,共5页
黄欣梅%李银%赵冬敏%刘宇卓%张敬峰%韩凯凯%钮慧敏
黃訢梅%李銀%趙鼕敏%劉宇卓%張敬峰%韓凱凱%鈕慧敏
황흔매%리은%조동민%류우탁%장경봉%한개개%뉴혜민
禽黄病毒%E蛋白%原核表达%抗原性
禽黃病毒%E蛋白%原覈錶達%抗原性
금황병독%E단백%원핵표체%항원성
选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白.根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-E,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.结果表明,鹅黄病毒E基因在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子量约为70 kDa,主要以包涵体形式存在于菌体中.Western Blot和间接免疫荧光试验发现,重组E蛋白具有较好的反应原性和良好的免疫原性.鹅黄病毒E蛋白的原核表达为进一步研究该蛋白功能、建立血清学检测方法及研制亚单位疫苗奠定了基础.
選取鵝黃病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因進行剋隆、錶達和純化,以穫得能應用于血清學診斷和可作為亞單位疫苗的重組蛋白.根據鵝黃病毒JS804株全基因序列設計瞭1對引物,採用RT-PCR方法擴增齣瞭鵝黃病毒的E基因,將其剋隆到錶達載體pET32a(+)中,構建瞭重組錶達質粒pET32a-E,轉化大腸桿菌BL21(DE3),併用IPTG進行誘導錶達.結果錶明,鵝黃病毒E基因在大腸桿菌中穫得高效錶達,融閤蛋白分子量約為70 kDa,主要以包涵體形式存在于菌體中.Western Blot和間接免疫熒光試驗髮現,重組E蛋白具有較好的反應原性和良好的免疫原性.鵝黃病毒E蛋白的原覈錶達為進一步研究該蛋白功能、建立血清學檢測方法及研製亞單位疫苗奠定瞭基礎.
선취아황병독낭막단백(E단백)기인진행극륭、표체화순화,이획득능응용우혈청학진단화가작위아단위역묘적중조단백.근거아황병독JS804주전기인서렬설계료1대인물,채용RT-PCR방법확증출료아황병독적E기인,장기극륭도표체재체pET32a(+)중,구건료중조표체질립pET32a-E,전화대장간균BL21(DE3),병용IPTG진행유도표체.결과표명,아황병독E기인재대장간균중획득고효표체,융합단백분자량약위70 kDa,주요이포함체형식존재우균체중.Western Blot화간접면역형광시험발현,중조E단백구유교호적반응원성화량호적면역원성.아황병독E단백적원핵표체위진일보연구해단백공능、건립혈청학검측방법급연제아단위역묘전정료기출.
