广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
6期
821-826
,共6页
李晓艳%于力%于生友%温捷
李曉豔%于力%于生友%溫捷
리효염%우력%우생우%온첩
嘌呤霉素%CD2AP%肾组织%足细胞
嘌呤黴素%CD2AP%腎組織%足細胞
표령매소%CD2AP%신조직%족세포
目的 观察CD2AP分子mRNA和蛋白的表达在嘌呤霉素(PAN)肾病模型及肾小球足细胞系损伤中的作用.方法 将雄性SD大鼠64只随机分为肾病模型组和对照组,每组32只.肾病模型组大鼠尾静脉注射PAN 5 mg/kg,建立PAN肾病模型;对照组注射8 mg/kg生理盐水.分别于第2、4、6和8周每组各处死8只大鼠用于实验.体外培养小鼠肾小球足细胞系(MPC5),分为细胞刺激组和对照组,细胞刺激组给予PAN刺激足细胞,于刺激后12、24和48 h收集足细胞用于实验;对照组用RPMI 1640培养液培养足细胞.光镜下观察肾病模型组肾组织的病理学改变;倒置显微镜下观察细胞刺激组足细胞的形态变化;应用荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光染色检测肾病模型组、细胞刺激组和对照组不同时间点CD2AP分子mRNA、蛋白表达及分布的变化.结果 (1)肾病模型组病理学变化为系膜和细胞外基质增生,部分或广泛肾小球呈局灶节段性硬化;肾病模型组注射PAN后第2周CD2AP分子mRNA和蛋白的表达量明显下降,一直持续至第8周.(2)细胞刺激组形态变化为刺激后12、24及48 h足细胞体积明显缩小,主要表现为足突回缩、消失及失去细胞间连接;细胞刺激组在给予PAN刺激后12 h CD2AP分子mRNA表达明显下降,mRNA表达下降持续至PAN刺激后48 h;CD2AP的蛋白表达在刺激足细胞12 h时无显著改变,在24和48 h时CD2AP的蛋白表达明显下降.(3)免疫荧光染色显示,正常情况下CD2AP均匀分布于足细胞的细胞核、细胞浆及细胞膜;细胞刺激组12和24 h CD2AP分布出现异常,在细胞核和细胞浆呈粗颗粒状分布,刺激48 h后在细胞膜和细胞浆出现分布缺失.结论 CD2AP在大鼠PAN肾病模型及体外培养肾小球足细胞系中mRNA和蛋白的表达明显下调,提示CD2AP分子是肾小球足细胞损伤的重要标志,CD2AP表达量及分布变化可能是临床上蛋白尿发生的分子机制.
目的 觀察CD2AP分子mRNA和蛋白的錶達在嘌呤黴素(PAN)腎病模型及腎小毬足細胞繫損傷中的作用.方法 將雄性SD大鼠64隻隨機分為腎病模型組和對照組,每組32隻.腎病模型組大鼠尾靜脈註射PAN 5 mg/kg,建立PAN腎病模型;對照組註射8 mg/kg生理鹽水.分彆于第2、4、6和8週每組各處死8隻大鼠用于實驗.體外培養小鼠腎小毬足細胞繫(MPC5),分為細胞刺激組和對照組,細胞刺激組給予PAN刺激足細胞,于刺激後12、24和48 h收集足細胞用于實驗;對照組用RPMI 1640培養液培養足細胞.光鏡下觀察腎病模型組腎組織的病理學改變;倒置顯微鏡下觀察細胞刺激組足細胞的形態變化;應用熒光定量PCR、Western blot和免疫熒光染色檢測腎病模型組、細胞刺激組和對照組不同時間點CD2AP分子mRNA、蛋白錶達及分佈的變化.結果 (1)腎病模型組病理學變化為繫膜和細胞外基質增生,部分或廣汎腎小毬呈跼竈節段性硬化;腎病模型組註射PAN後第2週CD2AP分子mRNA和蛋白的錶達量明顯下降,一直持續至第8週.(2)細胞刺激組形態變化為刺激後12、24及48 h足細胞體積明顯縮小,主要錶現為足突迴縮、消失及失去細胞間連接;細胞刺激組在給予PAN刺激後12 h CD2AP分子mRNA錶達明顯下降,mRNA錶達下降持續至PAN刺激後48 h;CD2AP的蛋白錶達在刺激足細胞12 h時無顯著改變,在24和48 h時CD2AP的蛋白錶達明顯下降.(3)免疫熒光染色顯示,正常情況下CD2AP均勻分佈于足細胞的細胞覈、細胞漿及細胞膜;細胞刺激組12和24 h CD2AP分佈齣現異常,在細胞覈和細胞漿呈粗顆粒狀分佈,刺激48 h後在細胞膜和細胞漿齣現分佈缺失.結論 CD2AP在大鼠PAN腎病模型及體外培養腎小毬足細胞繫中mRNA和蛋白的錶達明顯下調,提示CD2AP分子是腎小毬足細胞損傷的重要標誌,CD2AP錶達量及分佈變化可能是臨床上蛋白尿髮生的分子機製.
목적 관찰CD2AP분자mRNA화단백적표체재표령매소(PAN)신병모형급신소구족세포계손상중적작용.방법 장웅성SD대서64지수궤분위신병모형조화대조조,매조32지.신병모형조대서미정맥주사PAN 5 mg/kg,건립PAN신병모형;대조조주사8 mg/kg생리염수.분별우제2、4、6화8주매조각처사8지대서용우실험.체외배양소서신소구족세포계(MPC5),분위세포자격조화대조조,세포자격조급여PAN자격족세포,우자격후12、24화48 h수집족세포용우실험;대조조용RPMI 1640배양액배양족세포.광경하관찰신병모형조신조직적병이학개변;도치현미경하관찰세포자격조족세포적형태변화;응용형광정량PCR、Western blot화면역형광염색검측신병모형조、세포자격조화대조조불동시간점CD2AP분자mRNA、단백표체급분포적변화.결과 (1)신병모형조병이학변화위계막화세포외기질증생,부분혹엄범신소구정국조절단성경화;신병모형조주사PAN후제2주CD2AP분자mRNA화단백적표체량명현하강,일직지속지제8주.(2)세포자격조형태변화위자격후12、24급48 h족세포체적명현축소,주요표현위족돌회축、소실급실거세포간련접;세포자격조재급여PAN자격후12 h CD2AP분자mRNA표체명현하강,mRNA표체하강지속지PAN자격후48 h;CD2AP적단백표체재자격족세포12 h시무현저개변,재24화48 h시CD2AP적단백표체명현하강.(3)면역형광염색현시,정상정황하CD2AP균균분포우족세포적세포핵、세포장급세포막;세포자격조12화24 h CD2AP분포출현이상,재세포핵화세포장정조과립상분포,자격48 h후재세포막화세포장출현분포결실.결론 CD2AP재대서PAN신병모형급체외배양신소구족세포계중mRNA화단백적표체명현하조,제시CD2AP분자시신소구족세포손상적중요표지,CD2AP표체량급분포변화가능시림상상단백뇨발생적분자궤제.
