解剖学杂志
解剖學雜誌
해부학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANATOMY
2013年
2期
170-172,封4
,共4页
杨慈清%李小英%卢习%付苏雷%赵善廷%林俊堂
楊慈清%李小英%盧習%付囌雷%趙善廷%林俊堂
양자청%리소영%로습%부소뢰%조선정%림준당
小鼠%转基因方法%子宫内电转
小鼠%轉基因方法%子宮內電轉
소서%전기인방법%자궁내전전
目的:建立小鼠子宫内电转基因技术,比较分析转染绿色荧光蛋白(GFP)后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响.方法:将怀孕15d的小鼠,水合氯醛麻醉后,取出两侧子宫,用毛细管注射针将2μg/μl的pCAGGS-GFP质粒0.5～1 μl准确注射到胎鼠侧脑室,在电压40 V、每次脉冲60 ms,间隔940 ms,电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后24 h取材,甲醛固定冷冻冠状切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化,荧光免疫组织化学检测α-SMA的表达差异.结果:妊娠15d孕鼠转染24 h后小鼠成活率80％(8/10),胚胎成活率为54.2％(13/24),存活胚胎GFP阳性表达率为61.5％(8/13),GFP阳性表达胚胎脑组织切片,基因转染区域和正常组织区组织形态结构和α-SMA表达不存在差别.结论:成功建立了小鼠子宫内电转基因的方法.
目的:建立小鼠子宮內電轉基因技術,比較分析轉染綠色熒光蛋白(GFP)後對胚胎髮育及相關蛋白錶達的影響.方法:將懷孕15d的小鼠,水閤氯醛痳醉後,取齣兩側子宮,用毛細管註射針將2μg/μl的pCAGGS-GFP質粒0.5～1 μl準確註射到胎鼠側腦室,在電壓40 V、每次脈遲60 ms,間隔940 ms,電脈遲6次的條件下進行定時定位活體電轉基因,電轉後24 h取材,甲醛固定冷凍冠狀切片,DAPI染細胞覈觀察組織形態結構變化,熒光免疫組織化學檢測α-SMA的錶達差異.結果:妊娠15d孕鼠轉染24 h後小鼠成活率80％(8/10),胚胎成活率為54.2％(13/24),存活胚胎GFP暘性錶達率為61.5％(8/13),GFP暘性錶達胚胎腦組織切片,基因轉染區域和正常組織區組織形態結構和α-SMA錶達不存在差彆.結論:成功建立瞭小鼠子宮內電轉基因的方法.
목적:건립소서자궁내전전기인기술,비교분석전염록색형광단백(GFP)후대배태발육급상관단백표체적영향.방법:장부잉15d적소서,수합록철마취후,취출량측자궁,용모세관주사침장2μg/μl적pCAGGS-GFP질립0.5～1 μl준학주사도태서측뇌실,재전압40 V、매차맥충60 ms,간격940 ms,전맥충6차적조건하진행정시정위활체전전기인,전전후24 h취재,갑철고정냉동관상절편,DAPI염세포핵관찰조직형태결구변화,형광면역조직화학검측α-SMA적표체차이.결과:임신15d잉서전염24 h후소서성활솔80％(8/10),배태성활솔위54.2％(13/24),존활배태GFP양성표체솔위61.5％(8/13),GFP양성표체배태뇌조직절편,기인전염구역화정상조직구조직형태결구화α-SMA표체불존재차별.결론:성공건립료소서자궁내전전기인적방법.
