中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2012年
31期
131-136
,共6页
谢贺%高玉龙%桂毅杰%宋中邦%樊龙江%肖炳光%卢秀萍
謝賀%高玉龍%桂毅傑%宋中邦%樊龍江%肖炳光%盧秀萍
사하%고옥룡%계의걸%송중방%번룡강%초병광%로수평
IMP分子标记%烟草%PCR反应体系
IMP分子標記%煙草%PCR反應體繫
IMP분자표기%연초%PCR반응체계
为满足烟草遗传分析的需求,建立稳定的IMP标记扩增方法,对IMP分子标记体系进行了优化.以烟草DNA为模板,利用Li-cor 4300凝胶分离系统,优化了模板、Mg2+、dNTP、聚合酶浓度等IRD荧光引物扩增反应体系主要参数,建立分析IMP标记的平台.结果显示,影响烟草荧光引物扩增反应最大的因素是dNTPs和引物浓度,反应体系对Mg2+浓度的要求较宽泛,同时,不同的引物对各因素的浓度要求也有差异.最终确定20μL反应体系中,模板DNA 70 ng,Mg2+浓度2.0mmol/L,dNTPs为0.2mmol/L,rTaq DNA聚合酶1.5U,引物浓度均为1μmol/L.该体系扩增条带稳定,重复性好,适合烟草遗传多样性分析.
為滿足煙草遺傳分析的需求,建立穩定的IMP標記擴增方法,對IMP分子標記體繫進行瞭優化.以煙草DNA為模闆,利用Li-cor 4300凝膠分離繫統,優化瞭模闆、Mg2+、dNTP、聚閤酶濃度等IRD熒光引物擴增反應體繫主要參數,建立分析IMP標記的平檯.結果顯示,影響煙草熒光引物擴增反應最大的因素是dNTPs和引物濃度,反應體繫對Mg2+濃度的要求較寬汎,同時,不同的引物對各因素的濃度要求也有差異.最終確定20μL反應體繫中,模闆DNA 70 ng,Mg2+濃度2.0mmol/L,dNTPs為0.2mmol/L,rTaq DNA聚閤酶1.5U,引物濃度均為1μmol/L.該體繫擴增條帶穩定,重複性好,適閤煙草遺傳多樣性分析.
위만족연초유전분석적수구,건립은정적IMP표기확증방법,대IMP분자표기체계진행료우화.이연초DNA위모판,이용Li-cor 4300응효분리계통,우화료모판、Mg2+、dNTP、취합매농도등IRD형광인물확증반응체계주요삼수,건립분석IMP표기적평태.결과현시,영향연초형광인물확증반응최대적인소시dNTPs화인물농도,반응체계대Mg2+농도적요구교관범,동시,불동적인물대각인소적농도요구야유차이.최종학정20μL반응체계중,모판DNA 70 ng,Mg2+농도2.0mmol/L,dNTPs위0.2mmol/L,rTaq DNA취합매1.5U,인물농도균위1μmol/L.해체계확증조대은정,중복성호,괄합연초유전다양성분석.
