中国环境科学
中國環境科學
중국배경과학
CHINA ENVIRONMENTAL SCIENCE
2009年
12期
1272-1276
,共5页
陈亮%任随周%张培培%许攻英%孙国萍
陳亮%任隨週%張培培%許攻英%孫國萍
진량%임수주%장배배%허공영%손국평
三苯基甲烷染料%嗜水气单胞菌DN322%脱色酶%高表达%纯化
三苯基甲烷染料%嗜水氣單胞菌DN322%脫色酶%高錶達%純化
삼분기갑완염료%기수기단포균DN322%탈색매%고표체%순화
triphenylmethane dyes%Aeromonas hydrophila strain DN322%decolorization enzyme%over expression%purification
用PCR方法从嗜水气单胞菌DN322基因组中扩增出编码三苯基甲烷类染料脱色酶TpmD的基因,与表达载体pET-22b(+)连接构建成重组质粒pET22-tpmD,转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组工程菌株.结果表明,经IPTG诱导,脱色酶基因可高效表达,粗酶液降解结晶紫、孔雀石绿、碱性品红、灿烂绿的比活力达到569.5,386.9,516.1,273.0U/g.表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度达94.05%.对4种染料的比活力分别达到1075.3,1042.8,903.9,484.3U/g,重组质粒稳定存在于工程菌中,便于规模化发酵生产.
用PCR方法從嗜水氣單胞菌DN322基因組中擴增齣編碼三苯基甲烷類染料脫色酶TpmD的基因,與錶達載體pET-22b(+)連接構建成重組質粒pET22-tpmD,轉化大腸桿菌BL21(DE3)得到重組工程菌株.結果錶明,經IPTG誘導,脫色酶基因可高效錶達,粗酶液降解結晶紫、孔雀石綠、堿性品紅、燦爛綠的比活力達到569.5,386.9,516.1,273.0U/g.錶達產物經Ni-NTA親和層析法一步純化,蛋白純度達94.05%.對4種染料的比活力分彆達到1075.3,1042.8,903.9,484.3U/g,重組質粒穩定存在于工程菌中,便于規模化髮酵生產.
용PCR방법종기수기단포균DN322기인조중확증출편마삼분기갑완류염료탈색매TpmD적기인,여표체재체pET-22b(+)련접구건성중조질립pET22-tpmD,전화대장간균BL21(DE3)득도중조공정균주.결과표명,경IPTG유도,탈색매기인가고효표체,조매액강해결정자、공작석록、감성품홍、찬란록적비활력체도569.5,386.9,516.1,273.0U/g.표체산물경Ni-NTA친화층석법일보순화,단백순도체94.05%.대4충염료적비활력분별체도1075.3,1042.8,903.9,484.3U/g,중조질립은정존재우공정균중,편우규모화발효생산.
