中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2013年
6期
1578-1584
,共7页
贺艳霞%赵春亭%王丽%刘竹珍%吴少玲%冯献启%苏湛%隋爱华%刘晓丹
賀豔霞%趙春亭%王麗%劉竹珍%吳少玲%馮獻啟%囌湛%隋愛華%劉曉丹
하염하%조춘정%왕려%류죽진%오소령%풍헌계%소담%수애화%류효단
脐血%脐带间充质干细胞%CD34+细胞%HOXB4基因%体外扩增
臍血%臍帶間充質榦細胞%CD34+細胞%HOXB4基因%體外擴增
제혈%제대간충질간세포%CD34+세포%HOXB4기인%체외확증
umbilical cord blood%umbilical cord mesenchymal stem cell%CD34 + cells%HOXB4 gene%in vitro expansion
本研究探讨直接转染HOXB4基因和转染HOXB4基因的人脐带间充质干细胞体外扩增人脐血CD34+细胞中有核细胞数、CD34+细胞比例与扩增倍数、细胞周期及集落形成能力的异同.将人脐带间充质干细胞(HUC-MSC)分为2组,1组利用慢病毒载体将HOXB4基因转染至HUCMSC并建立滋养层(HOXB4-HUCMSC),另1组建立未转染的滋养层(HUCMSC).应用免疫磁珠分选系统(MACS)分选出人脐血CD34+细胞,在含细胞因子的培养液中培养48 h后分5组,其中对照组2组:A组CD34+细胞(CD34+ cells)为空白对照组,B组空病毒转染CD34+细胞(GFP-CD34+ cells)为阴性对照组;实验组共3组:直接转染HOXB4基因组(HOXB4-CD34+ cells)为C组;HUCMSC滋养层组(HUCMSC+ CD34+ cells)为D组;HOXB4-HUCMSC滋养层组(HOXB4-HUCMSC+ CD34+cells)为E组.于培养第6、10、14 d计数有核细胞数(NC),第10 d比较不同处理条件对CD34+细胞比例、细胞周期与集落形成能力的影响.结果表明,利用慢病毒载体可将HOXB4基因转染至HUCMSC并检测到表达,成功建立了HUCMSC与HOXB4-HUCMSC滋养层.经过14 d体外培养,5组有核细胞均得到显著扩增,比较表明,其效果依次为HOXB4-HUCMSC滋养层组＞直接转染HOXB4基因组＞HUCMSC滋养层组＞2对照组(P＜0.05).在体外扩增第10 d,5组有核细胞CD34+比例均大幅下降,经计算实验组CD34+细胞扩增倍数较第0d显著增高,经比较显示,CD34+细胞比例与扩增倍数高低依次为直接转HOXB4基因组＞HOXB4-HUCMSC滋养层组＞HUCM-SC滋养层组＞两对照组(P＜0.05);流式细胞仪分析细胞周期表明,实验组的S+G2/M期比例较对照组高,其中HOXB4-HUCMSC滋养层组比例最高,为41.57％,高于直接转染HOXB4基因的37.87％与HUCMSC的滋养层组的28.65％ (P ＜0.05).HOXB4-HUCMSC滋养层组与直接转HOXB4基因组的集落形成能力无差别,但均高于HUCMSC滋养层组与对照组.结论:HOXB4-HUCMSC滋养层可显著扩增CD34+细胞并可保持其于细胞活性,与直接转染HOXB4基因的CD34+细胞可能产生的潜在致病性基因插入和致突变性风险相比较,HOXB4-HUCMSC滋养层对CD34+细胞的体外扩增相对更安全,有潜在的应用价值.
本研究探討直接轉染HOXB4基因和轉染HOXB4基因的人臍帶間充質榦細胞體外擴增人臍血CD34+細胞中有覈細胞數、CD34+細胞比例與擴增倍數、細胞週期及集落形成能力的異同.將人臍帶間充質榦細胞(HUC-MSC)分為2組,1組利用慢病毒載體將HOXB4基因轉染至HUCMSC併建立滋養層(HOXB4-HUCMSC),另1組建立未轉染的滋養層(HUCMSC).應用免疫磁珠分選繫統(MACS)分選齣人臍血CD34+細胞,在含細胞因子的培養液中培養48 h後分5組,其中對照組2組:A組CD34+細胞(CD34+ cells)為空白對照組,B組空病毒轉染CD34+細胞(GFP-CD34+ cells)為陰性對照組;實驗組共3組:直接轉染HOXB4基因組(HOXB4-CD34+ cells)為C組;HUCMSC滋養層組(HUCMSC+ CD34+ cells)為D組;HOXB4-HUCMSC滋養層組(HOXB4-HUCMSC+ CD34+cells)為E組.于培養第6、10、14 d計數有覈細胞數(NC),第10 d比較不同處理條件對CD34+細胞比例、細胞週期與集落形成能力的影響.結果錶明,利用慢病毒載體可將HOXB4基因轉染至HUCMSC併檢測到錶達,成功建立瞭HUCMSC與HOXB4-HUCMSC滋養層.經過14 d體外培養,5組有覈細胞均得到顯著擴增,比較錶明,其效果依次為HOXB4-HUCMSC滋養層組＞直接轉染HOXB4基因組＞HUCMSC滋養層組＞2對照組(P＜0.05).在體外擴增第10 d,5組有覈細胞CD34+比例均大幅下降,經計算實驗組CD34+細胞擴增倍數較第0d顯著增高,經比較顯示,CD34+細胞比例與擴增倍數高低依次為直接轉HOXB4基因組＞HOXB4-HUCMSC滋養層組＞HUCM-SC滋養層組＞兩對照組(P＜0.05);流式細胞儀分析細胞週期錶明,實驗組的S+G2/M期比例較對照組高,其中HOXB4-HUCMSC滋養層組比例最高,為41.57％,高于直接轉染HOXB4基因的37.87％與HUCMSC的滋養層組的28.65％ (P ＜0.05).HOXB4-HUCMSC滋養層組與直接轉HOXB4基因組的集落形成能力無差彆,但均高于HUCMSC滋養層組與對照組.結論:HOXB4-HUCMSC滋養層可顯著擴增CD34+細胞併可保持其于細胞活性,與直接轉染HOXB4基因的CD34+細胞可能產生的潛在緻病性基因插入和緻突變性風險相比較,HOXB4-HUCMSC滋養層對CD34+細胞的體外擴增相對更安全,有潛在的應用價值.
본연구탐토직접전염HOXB4기인화전염HOXB4기인적인제대간충질간세포체외확증인제혈CD34+세포중유핵세포수、CD34+세포비례여확증배수、세포주기급집락형성능력적이동.장인제대간충질간세포(HUC-MSC)분위2조,1조이용만병독재체장HOXB4기인전염지HUCMSC병건립자양층(HOXB4-HUCMSC),령1조건립미전염적자양층(HUCMSC).응용면역자주분선계통(MACS)분선출인제혈CD34+세포,재함세포인자적배양액중배양48 h후분5조,기중대조조2조:A조CD34+세포(CD34+ cells)위공백대조조,B조공병독전염CD34+세포(GFP-CD34+ cells)위음성대조조;실험조공3조:직접전염HOXB4기인조(HOXB4-CD34+ cells)위C조;HUCMSC자양층조(HUCMSC+ CD34+ cells)위D조;HOXB4-HUCMSC자양층조(HOXB4-HUCMSC+ CD34+cells)위E조.우배양제6、10、14 d계수유핵세포수(NC),제10 d비교불동처리조건대CD34+세포비례、세포주기여집락형성능력적영향.결과표명,이용만병독재체가장HOXB4기인전염지HUCMSC병검측도표체,성공건립료HUCMSC여HOXB4-HUCMSC자양층.경과14 d체외배양,5조유핵세포균득도현저확증,비교표명,기효과의차위HOXB4-HUCMSC자양층조＞직접전염HOXB4기인조＞HUCMSC자양층조＞2대조조(P＜0.05).재체외확증제10 d,5조유핵세포CD34+비례균대폭하강,경계산실험조CD34+세포확증배수교제0d현저증고,경비교현시,CD34+세포비례여확증배수고저의차위직접전HOXB4기인조＞HOXB4-HUCMSC자양층조＞HUCM-SC자양층조＞량대조조(P＜0.05);류식세포의분석세포주기표명,실험조적S+G2/M기비례교대조조고,기중HOXB4-HUCMSC자양층조비례최고,위41.57％,고우직접전염HOXB4기인적37.87％여HUCMSC적자양층조적28.65％ (P ＜0.05).HOXB4-HUCMSC자양층조여직접전HOXB4기인조적집락형성능력무차별,단균고우HUCMSC자양층조여대조조.결론:HOXB4-HUCMSC자양층가현저확증CD34+세포병가보지기우세포활성,여직접전염HOXB4기인적CD34+세포가능산생적잠재치병성기인삽입화치돌변성풍험상비교,HOXB4-HUCMSC자양층대CD34+세포적체외확증상대경안전,유잠재적응용개치.
