天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2012年
11期
1107-1109
,共3页
曾宪旭%班振英%党秋红%楚天骄%雷冬梅
曾憲旭%班振英%黨鞦紅%楚天驕%雷鼕梅
증헌욱%반진영%당추홍%초천교%뢰동매
RNA干扰%乳腺肿瘤%雌激素受体α%遗传载体%质粒%癌%绿色荧光蛋白质类
RNA榦擾%乳腺腫瘤%雌激素受體α%遺傳載體%質粒%癌%綠色熒光蛋白質類
RNA간우%유선종류%자격소수체α%유전재체%질립%암%록색형광단백질류
目的:构建雌激素受体(ER)α基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度.方法:针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCsil-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生 shERα-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用shERα-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR和测序证实,成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108 TU/mL.结论:成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体,为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了基础.
目的:構建雌激素受體(ER)α基因RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體,檢測病毒感染細胞的滴度.方法:針對已經篩選確定的ERα基因RNAi有效靶序列,閤成靶序列的Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與經AgeⅠ和EcoR Ⅰ酶切後的pGCsil-GFP載體[含U6啟動子和綠色熒光蛋白(GFP)]連接產生 shERα-LV慢病毒載體,PCR篩選暘性剋隆,測序鑒定.用shERα-LV載體、pHelper 1.0載體和pHelper 2.0質粒共轉染包裝293T細胞,包裝產生慢病毒,以293T細胞GFP蛋白的錶達水平測定病毒滴度.結果:PCR和測序證實,成功構建ERα shRNA的慢病毒載體shERα-LV.包裝慢病毒,濃縮病毒懸液的滴度為2×108 TU/mL.結論:成功構建人ERα基因RNAi慢病毒載體,為ERα在乳腺癌髮生髮展中的研究提供瞭基礎.
목적:구건자격소수체(ER)α기인RNA간우(RNAi)만병독재체,검측병독감염세포적적도.방법:침대이경사선학정적ERα기인RNAi유효파서렬,합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경AgeⅠ화EcoR Ⅰ매절후적pGCsil-GFP재체[함U6계동자화록색형광단백(GFP)]련접산생 shERα-LV만병독재체,PCR사선양성극륭,측서감정.용shERα-LV재체、pHelper 1.0재체화pHelper 2.0질립공전염포장293T세포,포장산생만병독,이293T세포GFP단백적표체수평측정병독적도.결과:PCR화측서증실,성공구건ERα shRNA적만병독재체shERα-LV.포장만병독,농축병독현액적적도위2×108 TU/mL.결론:성공구건인ERα기인RNAi만병독재체,위ERα재유선암발생발전중적연구제공료기출.
