中国产前诊断杂志（电子版）
中國產前診斷雜誌（電子版）
중국산전진단잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF PRENATAL DIAGNOSIS(ELECTRONIC VERSION)
2008年
1期
20-24
,共5页
陈雅婷%张进%杜颖颖%王慧君%马端
陳雅婷%張進%杜穎穎%王慧君%馬耑
진아정%장진%두영영%왕혜군%마단
DNA甲基化%CpG岛%MeCP2蛋白
DNA甲基化%CpG島%MeCP2蛋白
DNA갑기화%CpG도%MeCP2단백
目的 利用甲基化CpG 结合蛋白(MBD)与甲基化CpG 岛特异性结合并相互作用的特性,建立一种高效、简便富集甲基化DNA 序列的方法.方法 首先应用PCR 扩增获得MeCP2基因的MBD编码序列,在大肠杆菌中诱导表达重组的GST MBD,采用GlutathioneSepharose4B (GSH Beads)获得了高纯度的GST MBD.并在不同盐浓度缓冲液体系中加入一定量用甲基化酶M.SssI处理过的DNA片段.结果 不同NaCl盐浓度和pH 值可以影响甲基化程度不同的DNA 结合量,最佳结合条件是400～500mM NaCl,pH7.9.结合的甲基化DNA 可以用高盐浓度(1M)进行有效洗脱.结论 该方法能够充分区分甲基化与非甲基化DNA,可以用于无创性产前诊断.
目的 利用甲基化CpG 結閤蛋白(MBD)與甲基化CpG 島特異性結閤併相互作用的特性,建立一種高效、簡便富集甲基化DNA 序列的方法.方法 首先應用PCR 擴增穫得MeCP2基因的MBD編碼序列,在大腸桿菌中誘導錶達重組的GST MBD,採用GlutathioneSepharose4B (GSH Beads)穫得瞭高純度的GST MBD.併在不同鹽濃度緩遲液體繫中加入一定量用甲基化酶M.SssI處理過的DNA片段.結果 不同NaCl鹽濃度和pH 值可以影響甲基化程度不同的DNA 結閤量,最佳結閤條件是400～500mM NaCl,pH7.9.結閤的甲基化DNA 可以用高鹽濃度(1M)進行有效洗脫.結論 該方法能夠充分區分甲基化與非甲基化DNA,可以用于無創性產前診斷.
목적 이용갑기화CpG 결합단백(MBD)여갑기화CpG 도특이성결합병상호작용적특성,건립일충고효、간편부집갑기화DNA 서렬적방법.방법 수선응용PCR 확증획득MeCP2기인적MBD편마서렬,재대장간균중유도표체중조적GST MBD,채용GlutathioneSepharose4B (GSH Beads)획득료고순도적GST MBD.병재불동염농도완충액체계중가입일정량용갑기화매M.SssI처리과적DNA편단.결과 불동NaCl염농도화pH 치가이영향갑기화정도불동적DNA 결합량,최가결합조건시400～500mM NaCl,pH7.9.결합적갑기화DNA 가이용고염농도(1M)진행유효세탈.결론 해방법능구충분구분갑기화여비갑기화DNA,가이용우무창성산전진단.
