CAJ | 학술논문

本研究比较3种不同细胞组分扩增CD4+ CD25+ Treg的效果并鉴定其免疫抑制功能.用免疫磁珠分选法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载CD3/CD28克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激,分别对CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞进行体外扩增培养,流式细胞术检测扩增后CD4+ CD25+ Treg细胞的比例及Foxp3基因的表达,用混合淋巴细胞反应(MLR)检测CD4+ CD25+ Treg对CD4+ CD25-T细胞增殖的抑制作用,CCK-8方法检测细胞抑制率.结果表明:经过2周培养,3组细胞均有明显的扩增.CD4+T细胞组扩增倍数为(77.8±5.32)倍,CD4+ CD25+ Treg细胞的比例由(6.61±1.00)％增加到(15.33±1.31)％.CD4+ CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为(95.20 ±7.67)倍,CD4+ CD25+ Treg细胞的比例由培养前(0.37±0.13)％增加到(9.84±0.98)％.磁珠分选后的CD4+ CD25+ Treg细胞的扩增倍数为(41.20±6.92)倍,细胞纯度由(86.75±1.25)％下降到(85.32±1.62)％,Foxp3表达由(76.92±1.13)％下降到(75.33±2.11)％,扩增前后的细胞纯度和Foxp3表达,差异无统计学意义(P＞0.05).体外抑制实验显示体外扩增的CD4+ CD25+ Treg细胞对CD4+ CD25-T细胞增殖有明显的抑制作用,对效应性T细胞增殖的抑制效能与其细胞数呈正相关.结论:本研究在体外成功扩增了小鼠CD4+ CD25+ Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4+ CD25+ Treg细胞组扩增的CD4+ CD25+ Treg细胞数量多,细胞纯度高.
본연구비교3충불동세포조분확증CD4+ CD25+ Treg적효과병감정기면역억제공능.용면역자주분선법종소서비세포중분선출CD4+T세포、CD4+ CD25+ Treg세포화CD4+ CD25-T세포,부재CD3/CD28극륭항체MACSiBead연합IL-2공동자격,분별대CD4+T세포、CD4+ CD25+ Treg세포화CD4+ CD25-T세포진행체외확증배양,류식세포술검측확증후CD4+ CD25+ Treg세포적비례급Foxp3기인적표체,용혼합림파세포반응(MLR)검측CD4+ CD25+ Treg대CD4+ CD25-T세포증식적억제작용,CCK-8방법검측세포억제솔.결과표명:경과2주배양,3조세포균유명현적확증.CD4+T세포조확증배수위(77.8±5.32)배,CD4+ CD25+ Treg세포적비례유(6.61±1.00)％증가도(15.33±1.31)％.CD4+ CD25-T세포조확증신속,배수위(95.20 ±7.67)배,CD4+ CD25+ Treg세포적비례유배양전(0.37±0.13)％증가도(9.84±0.98)％.자주분선후적CD4+ CD25+ Treg세포적확증배수위(41.20±6.92)배,세포순도유(86.75±1.25)％하강도(85.32±1.62)％,Foxp3표체유(76.92±1.13)％하강도(75.33±2.11)％,확증전후적세포순도화Foxp3표체,차이무통계학의의(P＞0.05).체외억제실험현시체외확증적CD4+ CD25+ Treg세포대CD4+ CD25-T세포증식유명현적억제작용,대효응성T세포증식적억제효능여기세포수정정상관.결론:본연구재체외성공확증료소서CD4+ CD25+ Treg세포,병차구유면역억제공능,기중CD4+ CD25+ Treg세포조확증적CD4+ CD25+ Treg세포수량다,세포순도고.