生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
5期
29-31
,共3页
pfu DNA聚合酶%高效表达%大肠杆菌%活性
pfu DNA聚閤酶%高效錶達%大腸桿菌%活性
pfu DNA취합매%고효표체%대장간균%활성
目的:在大肠杆菌中高效表达重组Pfu酶.方法:将pfu基因构建于载体pET28a上,重组质粒pET28a-pfu转化DH5α,获得了含pET28a-pfu重组表达菌株.在重组菌株OD600为0.2时,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达10～12 h后,菌体超声波破壁后,80℃条件下热变性30 min去除部分杂蛋白；粗酶液再经Ni离子亲和层析进一步纯化.结果:获得了高纯度的重组Pfu酶,利用该酶成功扩增出目的基因片段.结论:纯化的Pfu酶具有较高的活性,比活性为62 500 U/mg,该研究表达的重组酶完全可以替代商用Pfu酶.
目的:在大腸桿菌中高效錶達重組Pfu酶.方法:將pfu基因構建于載體pET28a上,重組質粒pET28a-pfu轉化DH5α,穫得瞭含pET28a-pfu重組錶達菌株.在重組菌株OD600為0.2時,經終濃度為1 mmol/L的IPTG誘導錶達10～12 h後,菌體超聲波破壁後,80℃條件下熱變性30 min去除部分雜蛋白；粗酶液再經Ni離子親和層析進一步純化.結果:穫得瞭高純度的重組Pfu酶,利用該酶成功擴增齣目的基因片段.結論:純化的Pfu酶具有較高的活性,比活性為62 500 U/mg,該研究錶達的重組酶完全可以替代商用Pfu酶.
목적:재대장간균중고효표체중조Pfu매.방법:장pfu기인구건우재체pET28a상,중조질립pET28a-pfu전화DH5α,획득료함pET28a-pfu중조표체균주.재중조균주OD600위0.2시,경종농도위1 mmol/L적IPTG유도표체10～12 h후,균체초성파파벽후,80℃조건하열변성30 min거제부분잡단백；조매액재경Ni리자친화층석진일보순화.결과:획득료고순도적중조Pfu매,이용해매성공확증출목적기인편단.결론:순화적Pfu매구유교고적활성,비활성위62 500 U/mg,해연구표체적중조매완전가이체대상용Pfu매.
