CAJ | 학술논문

本文旨在构建抗菌肽parasin Ⅰ大肠杆菌重组表达载体,表达人工重组parasin Ⅰ,并检测其抑菌活性.根据parasin Ⅰ的成熟肽序列和大肠杆菌密码子偏好性,人工合成1段57 bp的基因编码cDNA,通过PCR技术构建大肠杆菌重组表达质粒pET32-Para Ⅰ,并在parasin Ⅰ基因5′-端引入Xa因子酶切位点.重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后,在不同温度(37和20℃)条件下对阳性转化子进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果表明:IPTG成功诱导了1个21 ku的融合蛋白表达,重组蛋白占菌体总蛋白质的45％～50％.在低温条件下产生的融合蛋白主要以可溶性形式存在.可溶性重组蛋白经亲和层析纯化后,用Xa因子进行酶切,酶切产物经琼脂孔扩散法抑菌活性检测,结果显示其对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用.本试验实现了parasin Ⅰ的重组表达,表达产物经Xa因子酶切后具抑菌活性.
본문지재구건항균태parasin Ⅰ대장간균중조표체재체,표체인공중조parasin Ⅰ,병검측기억균활성.근거parasin Ⅰ적성숙태서렬화대장간균밀마자편호성,인공합성1단57 bp적기인편마cDNA,통과PCR기술구건대장간균중조표체질립pET32-Para Ⅰ,병재parasin Ⅰ기인5′-단인입Xa인자매절위점.중조재체전화대장간균Rosetta(DE3)균주후,재불동온도(37화20℃)조건하대양성전화자진행이병기류대반유당감(IPTG)유도표체.결과표명:IPTG성공유도료1개21 ku적융합단백표체,중조단백점균체총단백질적45％～50％.재저온조건하산생적융합단백주요이가용성형식존재.가용성중조단백경친화층석순화후,용Xa인자진행매절,매절산물경경지공확산법억균활성검측,결과현시기대금황색포도구균유일정억제작용.본시험실현료parasin Ⅰ적중조표체,표체산물경Xa인자매절후구억균활성.