安徽农学通报
安徽農學通報
안휘농학통보
AUHUI AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2013年
7期
31-33,107
,共4页
刘继科%曹福祥%郭川%彭继庆%冯延芝
劉繼科%曹福祥%郭川%彭繼慶%馮延芝
류계과%조복상%곽천%팽계경%풍연지
基质金属蛋白酶-7%基因克隆%原核表达
基質金屬蛋白酶-7%基因剋隆%原覈錶達
기질금속단백매-7%기인극륭%원핵표체
研究构建人基质金属蛋白酶7(MMP-7)的原核表达载体,并进行原核表达获得重组蛋白MMP-7.以人肾肿瘤组织总RNA为模板,PCR方法获得MMP-7成熟蛋白的基因序列,构建含10xhis标签的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3),并经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白,并经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),检测其表达情况.最终得到pET24a(+)-MMP-7-10his重组质粒,诱导表达后重组蛋白占总蛋白的41％左右,获得21.2kD大小蛋白,与目的蛋白大小一致,纯度大于90％,为进一步研究奠定基础.
研究構建人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)的原覈錶達載體,併進行原覈錶達穫得重組蛋白MMP-7.以人腎腫瘤組織總RNA為模闆,PCR方法穫得MMP-7成熟蛋白的基因序列,構建含10xhis標籤的原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL21 (DE3),併經異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,穫得重組蛋白,併經十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),檢測其錶達情況.最終得到pET24a(+)-MMP-7-10his重組質粒,誘導錶達後重組蛋白佔總蛋白的41％左右,穫得21.2kD大小蛋白,與目的蛋白大小一緻,純度大于90％,為進一步研究奠定基礎.
연구구건인기질금속단백매7(MMP-7)적원핵표체재체,병진행원핵표체획득중조단백MMP-7.이인신종류조직총RNA위모판,PCR방법획득MMP-7성숙단백적기인서렬,구건함10xhis표첨적원핵표체재체,전화대장간균BL21 (DE3),병경이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)유도표체,획득중조단백,병경십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE),검측기표체정황.최종득도pET24a(+)-MMP-7-10his중조질립,유도표체후중조단백점총단백적41％좌우,획득21.2kD대소단백,여목적단백대소일치,순도대우90％,위진일보연구전정기출.
