临床输血与检验
臨床輸血與檢驗
림상수혈여검험
JOURNAL OF CLINICAL TRANSFUSION AND LABORATORY MEDICINE
2013年
4期
336-339
,共4页
时振华%赵健%吴伟伟%杜鸿
時振華%趙健%吳偉偉%杜鴻
시진화%조건%오위위%두홍
Bcl-xL%cDNA克隆%RT-PCR%原核表达
Bcl-xL%cDNA剋隆%RT-PCR%原覈錶達
Bcl-xL%cDNA극륭%RT-PCR%원핵표체
Bcl-xL%cDNA cloning%RT-PCR%Protein expression
目的 克隆人Bcl-xL基因全长编码区,并利用载体pet28a在大肠埃希菌(ROS)原核表达人Bcl-xL蛋白,为探讨Bcl-xL与肿瘤的关系奠定基础.方法 分离胃癌患者外周血单核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR方法扩增Bel-xL基因,构建重组表达质粒pet28a/Bcl-xL；酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后增菌培养,IPTG 25℃诱导6h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,进一步利用免疫印迹法鉴定.结果 成功扩增获得Bcl-xL基因CDS区全长702 bp,与GenBank中发表的序列完全一致；成功构建了原核表达载体pet28a/Bcl-xL,并在工程菌ROS中获得大量表达.结论 扩增获得人Bcl-xL基因,并成功原核表达获得人Bcl-xL融合蛋白,为进一步深入研究其生物学功能奠定了基础.
目的 剋隆人Bcl-xL基因全長編碼區,併利用載體pet28a在大腸埃希菌(ROS)原覈錶達人Bcl-xL蛋白,為探討Bcl-xL與腫瘤的關繫奠定基礎.方法 分離胃癌患者外週血單覈細胞併提取總RNA;採用RT-PCR方法擴增Bel-xL基因,構建重組錶達質粒pet28a/Bcl-xL；酶切鑒定挑選暘性重組質粒轉化大腸埃希菌ROS,測序鑒定後增菌培養,IPTG 25℃誘導6h,SDS-PAGE電泳判斷以包涵體形式存在的帶有His標籤的融閤蛋白,進一步利用免疫印跡法鑒定.結果 成功擴增穫得Bcl-xL基因CDS區全長702 bp,與GenBank中髮錶的序列完全一緻；成功構建瞭原覈錶達載體pet28a/Bcl-xL,併在工程菌ROS中穫得大量錶達.結論 擴增穫得人Bcl-xL基因,併成功原覈錶達穫得人Bcl-xL融閤蛋白,為進一步深入研究其生物學功能奠定瞭基礎.
목적 극륭인Bcl-xL기인전장편마구,병이용재체pet28a재대장애희균(ROS)원핵표체인Bcl-xL단백,위탐토Bcl-xL여종류적관계전정기출.방법 분리위암환자외주혈단핵세포병제취총RNA;채용RT-PCR방법확증Bel-xL기인,구건중조표체질립pet28a/Bcl-xL；매절감정도선양성중조질립전화대장애희균ROS,측서감정후증균배양,IPTG 25℃유도6h,SDS-PAGE전영판단이포함체형식존재적대유His표첨적융합단백,진일보이용면역인적법감정.결과 성공확증획득Bcl-xL기인CDS구전장702 bp,여GenBank중발표적서렬완전일치；성공구건료원핵표체재체pet28a/Bcl-xL,병재공정균ROS중획득대량표체.결론 확증획득인Bcl-xL기인,병성공원핵표체획득인Bcl-xL융합단백,위진일보심입연구기생물학공능전정료기출.
