器官移植
器官移植
기관이식
OGRAN TRANSPLANTATION
2012年
6期
338-349,358
,共13页
养阴活血方药%环孢素%药物毒性%肾毒性%慢性%中药%纤维化
養陰活血方藥%環孢素%藥物毒性%腎毒性%慢性%中藥%纖維化
양음활혈방약%배포소%약물독성%신독성%만성%중약%섬유화
目的 探讨养阴活血方药拮抗环孢素(CsA)慢性肾毒性的作用及机制.方法 将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、依那普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各10只.采用钠耗竭法制作大鼠CsA肾毒性模型:给予钠缺乏饮食,每日皮下注射CsA 12.5 mg/(kg·d),连续4周.同时,按组别相应予以蒸馏水、依那普利(依那普利10倍成人剂量)、低剂量中药(养阴活血方药5倍成人剂量)、中剂量中药(养阴活血方药10倍成人剂量)、高剂量中药(养阴活血方药20倍成人剂量)灌胃.建组后14 d、28 d记录各组大鼠死亡率.建组后7 d、14 d、21 d、28 d,测定各组大鼠的血清肌酐(Scr)、尿肌酐、24 h尿蛋白定量,计算内生肌酐清除率(Ccr).建组后28 d处死大鼠,取右肾组织进行病理学检查和免疫组织化学染色,观察细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,包括纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、胶原蛋白(collagen,Col)Ⅳ和其调节因子转化生长因子(TGF)-β1的表达;取左肾组织进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别检测FN、ColⅣ、TGF-β1,以及抑制ECM生成基因包括组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-plasminogen activator,uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor,PAI)-1基因的核糖核酸(RNA)表达.结果 建组后14 d,中药高剂量组的死亡率为20%,依那普利组和对照组各为10%,中药中剂量组、中药低剂量组均无死亡.建组后28 d,除中药高剂量组的死亡率为20%、中药低剂量组的死亡率为0外,其余3组死亡率均为10%.建组7 d后各组大鼠肾功能逐渐恶化,24 h尿蛋白定量增加,于建组后14 d达到高峰.建组14 d后进入CsA慢性肾毒性期,各治疗组大鼠的肾功能均有所改善、24 h尿蛋白定量减少,但对照组仍然继续恶化.建组后28 d,中药高剂量组和中药中剂量组的Ccr明显高于对照组(均为P<0.05),中药各剂量组及依那普利组的24 h尿蛋白定量均低于对照组(P<0.05或P<0.01).肾组织病理切片常规苏木素-伊红(HE)染色表现为慢性CsA肾毒性肾间质纤维化,以对照组改变最为严重,依那普利组、中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组改变依次减弱.马松(Masson)染色可见肾小管及肾小球周围纤维增生,以对照组最为明显.免疫组织化学染色显示对照组的FN、ColⅣ及TGF-β1表达遍布肾小管皮质和髓质,依那普利组及中药各剂量组表达程度较轻.RT-PCR结果提示,FN基因的信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达强度以中药高剂量组最低、对照组最高;ColⅣ基因的mRNA表达强度以中药低剂量组最高,中药高剂量组最低;TGF-β1基因的mRNA表达强度以依那普利组、中药高剂量组最低,中药低剂量组表达最高.作为抑制ECM生成的tPA、uPA和PAI-1基因的mRNA在各组表达强度差异均无统计学意义.结论 养阴活血方药有类似依那普利拮抗大鼠CsA慢性肾毒性的作用,但对急性肾毒性无保护作用,其作用机制可能与下调TGF-β1等细胞因子,从而抑制ECM的合成有关.
目的 探討養陰活血方藥拮抗環孢素(CsA)慢性腎毒性的作用及機製.方法 將50隻Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為對照組、依那普利組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組,每組各10隻.採用鈉耗竭法製作大鼠CsA腎毒性模型:給予鈉缺乏飲食,每日皮下註射CsA 12.5 mg/(kg·d),連續4週.同時,按組彆相應予以蒸餾水、依那普利(依那普利10倍成人劑量)、低劑量中藥(養陰活血方藥5倍成人劑量)、中劑量中藥(養陰活血方藥10倍成人劑量)、高劑量中藥(養陰活血方藥20倍成人劑量)灌胃.建組後14 d、28 d記錄各組大鼠死亡率.建組後7 d、14 d、21 d、28 d,測定各組大鼠的血清肌酐(Scr)、尿肌酐、24 h尿蛋白定量,計算內生肌酐清除率(Ccr).建組後28 d處死大鼠,取右腎組織進行病理學檢查和免疫組織化學染色,觀察細胞外基質(extracellular matrix,ECM)成分,包括纖維連接蛋白(fibronectin,FN)、膠原蛋白(collagen,Col)Ⅳ和其調節因子轉化生長因子(TGF)-β1的錶達;取左腎組織進行逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR),分彆檢測FN、ColⅣ、TGF-β1,以及抑製ECM生成基因包括組織型纖溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)、尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-plasminogen activator,uPA)、纖溶酶原激活物抑製劑(plasminogen activator inhibitor,PAI)-1基因的覈糖覈痠(RNA)錶達.結果 建組後14 d,中藥高劑量組的死亡率為20%,依那普利組和對照組各為10%,中藥中劑量組、中藥低劑量組均無死亡.建組後28 d,除中藥高劑量組的死亡率為20%、中藥低劑量組的死亡率為0外,其餘3組死亡率均為10%.建組7 d後各組大鼠腎功能逐漸噁化,24 h尿蛋白定量增加,于建組後14 d達到高峰.建組14 d後進入CsA慢性腎毒性期,各治療組大鼠的腎功能均有所改善、24 h尿蛋白定量減少,但對照組仍然繼續噁化.建組後28 d,中藥高劑量組和中藥中劑量組的Ccr明顯高于對照組(均為P<0.05),中藥各劑量組及依那普利組的24 h尿蛋白定量均低于對照組(P<0.05或P<0.01).腎組織病理切片常規囌木素-伊紅(HE)染色錶現為慢性CsA腎毒性腎間質纖維化,以對照組改變最為嚴重,依那普利組、中藥低劑量組、中藥中劑量組及中藥高劑量組改變依次減弱.馬鬆(Masson)染色可見腎小管及腎小毬週圍纖維增生,以對照組最為明顯.免疫組織化學染色顯示對照組的FN、ColⅣ及TGF-β1錶達遍佈腎小管皮質和髓質,依那普利組及中藥各劑量組錶達程度較輕.RT-PCR結果提示,FN基因的信使RNA(messenger RNA,mRNA)錶達彊度以中藥高劑量組最低、對照組最高;ColⅣ基因的mRNA錶達彊度以中藥低劑量組最高,中藥高劑量組最低;TGF-β1基因的mRNA錶達彊度以依那普利組、中藥高劑量組最低,中藥低劑量組錶達最高.作為抑製ECM生成的tPA、uPA和PAI-1基因的mRNA在各組錶達彊度差異均無統計學意義.結論 養陰活血方藥有類似依那普利拮抗大鼠CsA慢性腎毒性的作用,但對急性腎毒性無保護作用,其作用機製可能與下調TGF-β1等細胞因子,從而抑製ECM的閤成有關.
목적 탐토양음활혈방약길항배포소(CsA)만성신독성적작용급궤제.방법 장50지Sprague-Dawley(SD)대서수궤분위대조조、의나보리조、중약저제량조、중약중제량조、중약고제량조,매조각10지.채용납모갈법제작대서CsA신독성모형:급여납결핍음식,매일피하주사CsA 12.5 mg/(kg·d),련속4주.동시,안조별상응여이증류수、의나보리(의나보리10배성인제량)、저제량중약(양음활혈방약5배성인제량)、중제량중약(양음활혈방약10배성인제량)、고제량중약(양음활혈방약20배성인제량)관위.건조후14 d、28 d기록각조대서사망솔.건조후7 d、14 d、21 d、28 d,측정각조대서적혈청기항(Scr)、뇨기항、24 h뇨단백정량,계산내생기항청제솔(Ccr).건조후28 d처사대서,취우신조직진행병이학검사화면역조직화학염색,관찰세포외기질(extracellular matrix,ECM)성분,포괄섬유련접단백(fibronectin,FN)、효원단백(collagen,Col)Ⅳ화기조절인자전화생장인자(TGF)-β1적표체;취좌신조직진행역전록취합매련반응(RT-PCR),분별검측FN、ColⅣ、TGF-β1,이급억제ECM생성기인포괄조직형섬용매원격활물(tissue-type plasminogen activator,tPA)、뇨격매형섬용매원격활물(urokinase-plasminogen activator,uPA)、섬용매원격활물억제제(plasminogen activator inhibitor,PAI)-1기인적핵당핵산(RNA)표체.결과 건조후14 d,중약고제량조적사망솔위20%,의나보리조화대조조각위10%,중약중제량조、중약저제량조균무사망.건조후28 d,제중약고제량조적사망솔위20%、중약저제량조적사망솔위0외,기여3조사망솔균위10%.건조7 d후각조대서신공능축점악화,24 h뇨단백정량증가,우건조후14 d체도고봉.건조14 d후진입CsA만성신독성기,각치료조대서적신공능균유소개선、24 h뇨단백정량감소,단대조조잉연계속악화.건조후28 d,중약고제량조화중약중제량조적Ccr명현고우대조조(균위P<0.05),중약각제량조급의나보리조적24 h뇨단백정량균저우대조조(P<0.05혹P<0.01).신조직병리절편상규소목소-이홍(HE)염색표현위만성CsA신독성신간질섬유화,이대조조개변최위엄중,의나보리조、중약저제량조、중약중제량조급중약고제량조개변의차감약.마송(Masson)염색가견신소관급신소구주위섬유증생,이대조조최위명현.면역조직화학염색현시대조조적FN、ColⅣ급TGF-β1표체편포신소관피질화수질,의나보리조급중약각제량조표체정도교경.RT-PCR결과제시,FN기인적신사RNA(messenger RNA,mRNA)표체강도이중약고제량조최저、대조조최고;ColⅣ기인적mRNA표체강도이중약저제량조최고,중약고제량조최저;TGF-β1기인적mRNA표체강도이의나보리조、중약고제량조최저,중약저제량조표체최고.작위억제ECM생성적tPA、uPA화PAI-1기인적mRNA재각조표체강도차이균무통계학의의.결론 양음활혈방약유유사의나보리길항대서CsA만성신독성적작용,단대급성신독성무보호작용,기작용궤제가능여하조TGF-β1등세포인자,종이억제ECM적합성유관.
