生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
5期
17-20
,共4页
张香春%冯磊%张鑫%何潇涵%吴子环%高凤山
張香春%馮磊%張鑫%何瀟涵%吳子環%高鳳山
장향춘%풍뢰%장흠%하소함%오자배%고봉산
荷包猪%SLA-2%重链基因%底物肽
荷包豬%SLA-2%重鏈基因%底物肽
하포저%SLA-2%중련기인%저물태
目的:构建荷包猪SLA-2重链基因偶合底物肽(BSP)并研究其在pET-21a(+)中的蛋白表达.方法:设计荷包猪SLA-2-BSP复合基因引物,PCR扩增荷包猪SLA-2-HB-BSP复合基因,并克隆至pMD(R)19-T Simple Vector,经酶切鉴定后,将SLA-2-HB-BSP复合基因与表达系统pET-21a(+)连接,并转化BL21 (Rosetta)菌进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白.结果:PCR结果显示,SLA-2-BSP大小为900bp左右,并成功克隆至pMD(R)19-T Simple Vector载体,酶切后大小为876bp,该基因连接pET-21 a(+)并转化宿主菌BL21(Rosetta)后,经诱导表达和SDS-PAGE检测,目标蛋白大小为34.4kDa,经优化后目的蛋白相对表达含量达到了45％.结论:该研究成功构建荷包猪SLA-2偶合BSP的pET-21a重组表达系,为下一步构建猪SLA Ⅰ类分子四聚体奠定了基础.
目的:構建荷包豬SLA-2重鏈基因偶閤底物肽(BSP)併研究其在pET-21a(+)中的蛋白錶達.方法:設計荷包豬SLA-2-BSP複閤基因引物,PCR擴增荷包豬SLA-2-HB-BSP複閤基因,併剋隆至pMD(R)19-T Simple Vector,經酶切鑒定後,將SLA-2-HB-BSP複閤基因與錶達繫統pET-21a(+)連接,併轉化BL21 (Rosetta)菌進行誘導錶達,SDS-PAGE檢測目的蛋白.結果:PCR結果顯示,SLA-2-BSP大小為900bp左右,併成功剋隆至pMD(R)19-T Simple Vector載體,酶切後大小為876bp,該基因連接pET-21 a(+)併轉化宿主菌BL21(Rosetta)後,經誘導錶達和SDS-PAGE檢測,目標蛋白大小為34.4kDa,經優化後目的蛋白相對錶達含量達到瞭45％.結論:該研究成功構建荷包豬SLA-2偶閤BSP的pET-21a重組錶達繫,為下一步構建豬SLA Ⅰ類分子四聚體奠定瞭基礎.
목적:구건하포저SLA-2중련기인우합저물태(BSP)병연구기재pET-21a(+)중적단백표체.방법:설계하포저SLA-2-BSP복합기인인물,PCR확증하포저SLA-2-HB-BSP복합기인,병극륭지pMD(R)19-T Simple Vector,경매절감정후,장SLA-2-HB-BSP복합기인여표체계통pET-21a(+)련접,병전화BL21 (Rosetta)균진행유도표체,SDS-PAGE검측목적단백.결과:PCR결과현시,SLA-2-BSP대소위900bp좌우,병성공극륭지pMD(R)19-T Simple Vector재체,매절후대소위876bp,해기인련접pET-21 a(+)병전화숙주균BL21(Rosetta)후,경유도표체화SDS-PAGE검측,목표단백대소위34.4kDa,경우화후목적단백상대표체함량체도료45％.결론:해연구성공구건하포저SLA-2우합BSP적pET-21a중조표체계,위하일보구건저SLA Ⅰ류분자사취체전정료기출.
