食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
261-267
,共7页
姚晶%张阳旸%吴正钧%任婧
姚晶%張暘旸%吳正鈞%任婧
요정%장양양%오정균%임청
唾液酸化路易斯-X%牛%α-1,3-岩藻糖基转移酶%克隆%表达
唾液痠化路易斯-X%牛%α-1,3-巖藻糖基轉移酶%剋隆%錶達
타액산화로역사-X%우%α-1,3-암조당기전이매%극륭%표체
Sialyl lewis x,Slex%B.taurus%alpha-(1,3)-fucosyltransferase,FT%clone%expression
唾液酸化路易斯-X(sialyl lewis x,Slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应.克隆表达Slex合成过程中的关键酶,就可以在体外进行Slex的生物合成,从而进行相关生物制剂的开发.α-1,3-岩藻糖基转移酶(alpha-(1,3)-fucosyhransferase,FT)就是参与Slex生物合成过程的关键酶之一.利用相关软件对牛的FT基因进行了生物信息学的分析,了解了FT的相关理化性质.通过PCR的方法获得了兀T基因,构建了重组质粒pMD19-FT,并亚克隆至表达载体pPIC9K.通过电转化将线性化的表达质粒pPIC9K-FT整合到宿主菌Pic hia pastoris GS115基因组上,构建了重组酵母GS115-FT.经诱导表达后,SDS-PAGE检测到了目的蛋白质条带,证明了此基因在P pastoris GS115中能够可溶性表达.
唾液痠化路易斯-X(sialyl lewis x,Slex)是選擇素傢族的一箇共同糖配體,通過與選擇素競爭性地結閤炎性細胞,可以抑製炎癥反應.剋隆錶達Slex閤成過程中的關鍵酶,就可以在體外進行Slex的生物閤成,從而進行相關生物製劑的開髮.α-1,3-巖藻糖基轉移酶(alpha-(1,3)-fucosyhransferase,FT)就是參與Slex生物閤成過程的關鍵酶之一.利用相關軟件對牛的FT基因進行瞭生物信息學的分析,瞭解瞭FT的相關理化性質.通過PCR的方法穫得瞭兀T基因,構建瞭重組質粒pMD19-FT,併亞剋隆至錶達載體pPIC9K.通過電轉化將線性化的錶達質粒pPIC9K-FT整閤到宿主菌Pic hia pastoris GS115基因組上,構建瞭重組酵母GS115-FT.經誘導錶達後,SDS-PAGE檢測到瞭目的蛋白質條帶,證明瞭此基因在P pastoris GS115中能夠可溶性錶達.
타액산화로역사-X(sialyl lewis x,Slex)시선택소가족적일개공동당배체,통과여선택소경쟁성지결합염성세포,가이억제염증반응.극륭표체Slex합성과정중적관건매,취가이재체외진행Slex적생물합성,종이진행상관생물제제적개발.α-1,3-암조당기전이매(alpha-(1,3)-fucosyhransferase,FT)취시삼여Slex생물합성과정적관건매지일.이용상관연건대우적FT기인진행료생물신식학적분석,료해료FT적상관이화성질.통과PCR적방법획득료올T기인,구건료중조질립pMD19-FT,병아극륭지표체재체pPIC9K.통과전전화장선성화적표체질립pPIC9K-FT정합도숙주균Pic hia pastoris GS115기인조상,구건료중조효모GS115-FT.경유도표체후,SDS-PAGE검측도료목적단백질조대,증명료차기인재P pastoris GS115중능구가용성표체.
