农业科学与技术（英文版）
農業科學與技術（英文版）
농업과학여기술（영문판）
AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY
2013年
3期
402-406
,共5页
甘蓝型油菜%叶绿体DNA%多顺反子%双交换%表达载体%功能鉴定
甘藍型油菜%葉綠體DNA%多順反子%雙交換%錶達載體%功能鑒定
감람형유채%협록체DNA%다순반자%쌍교환%표체재체%공능감정
Brassica napus L.%Chloroplast DNA%Multicistron%Double cross-over%Expression vector%Functional identification
[目的]构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体,以期为油菜叶绿体基因工程研究奠定基础.[方法]根据GenBank中已知的油菜叶绿体DNA序列AF267640和Z50868,设计两对引物,用PCR方法获得了两段甘蓝型油菜叶绿体DNA片段,分别命名为RbcL和ACCD.将这两段甘蓝型油菜叶绿体DNA同源片段克隆到质粒pMD18-T中得到质粒pHBM715,然后再将由壮观霉素抗性基因aadA、甘露聚糖酶基因man和绿色荧光蛋白基因gfp这3个基因串联的表达盒克隆到质粒pHBM715中,从而构建成甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体pHBM716,并将该载体在大肠杆菌中进行表达鉴定.[结果]通过平板定性分析对所构建的油菜叶绿体表达载体上的表达盒进行了功能鉴定,表明同一多顺反子的3个基因在大肠杆菌中均得到了表达.[结论]该研究成功构建了甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体,为油菜叶绿体基因工程研究奠定了基础.
[目的]構建甘藍型油菜葉綠體多順反子錶達載體,以期為油菜葉綠體基因工程研究奠定基礎.[方法]根據GenBank中已知的油菜葉綠體DNA序列AF267640和Z50868,設計兩對引物,用PCR方法穫得瞭兩段甘藍型油菜葉綠體DNA片段,分彆命名為RbcL和ACCD.將這兩段甘藍型油菜葉綠體DNA同源片段剋隆到質粒pMD18-T中得到質粒pHBM715,然後再將由壯觀黴素抗性基因aadA、甘露聚糖酶基因man和綠色熒光蛋白基因gfp這3箇基因串聯的錶達盒剋隆到質粒pHBM715中,從而構建成甘藍型油菜葉綠體多順反子錶達載體pHBM716,併將該載體在大腸桿菌中進行錶達鑒定.[結果]通過平闆定性分析對所構建的油菜葉綠體錶達載體上的錶達盒進行瞭功能鑒定,錶明同一多順反子的3箇基因在大腸桿菌中均得到瞭錶達.[結論]該研究成功構建瞭甘藍型油菜葉綠體多順反子錶達載體,為油菜葉綠體基因工程研究奠定瞭基礎.
[목적]구건감람형유채협록체다순반자표체재체,이기위유채협록체기인공정연구전정기출.[방법]근거GenBank중이지적유채협록체DNA서렬AF267640화Z50868,설계량대인물,용PCR방법획득료량단감람형유채협록체DNA편단,분별명명위RbcL화ACCD.장저량단감람형유채협록체DNA동원편단극륭도질립pMD18-T중득도질립pHBM715,연후재장유장관매소항성기인aadA、감로취당매기인man화록색형광단백기인gfp저3개기인천련적표체합극륭도질립pHBM715중,종이구건성감람형유채협록체다순반자표체재체pHBM716,병장해재체재대장간균중진행표체감정.[결과]통과평판정성분석대소구건적유채협록체표체재체상적표체합진행료공능감정,표명동일다순반자적3개기인재대장간균중균득도료표체.[결론]해연구성공구건료감람형유채협록체다순반자표체재체,위유채협록체기인공정연구전정료기출.
