中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2013年
8期
26-30
,共5页
唐晓艳%高冬妮%李梅%葛菁萍%平文祥%楼庄伟
唐曉豔%高鼕妮%李梅%葛菁萍%平文祥%樓莊偉
당효염%고동니%리매%갈정평%평문상%루장위
昆虫杆状病毒表达系统%增强型绿色荧光蛋白%昆虫细胞
昆蟲桿狀病毒錶達繫統%增彊型綠色熒光蛋白%昆蟲細胞
곤충간상병독표체계통%증강형록색형광단백%곤충세포
为构建表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体.利用Sf-9细胞表达eGFP,用PCR法从重组Bacmid和pEGFP-C3质粒中扩增gp64SP、eGFP和VSVGED片段,利用一步法SOE-PCR将3个片段连接在一起.用XbaⅠ和Hind Ⅲ酶切融合片段与pFastBac PH,连接获得阳性质粒命名为pFB/LM-PH.转化E coli DH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Bv-LM-PH,感染Sf9昆虫细胞.结果表明:通过倒置荧光显微镜观察细胞形态及荧光表达情况；结果证实:感染的Sf9细胞可表达外源基因eGFP.重组pFB/LM-PH载体具备表达eGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达eGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体.
為構建錶達增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)融閤蛋白的昆蟲桿狀病毒轉移載體.利用Sf-9細胞錶達eGFP,用PCR法從重組Bacmid和pEGFP-C3質粒中擴增gp64SP、eGFP和VSVGED片段,利用一步法SOE-PCR將3箇片段連接在一起.用XbaⅠ和Hind Ⅲ酶切融閤片段與pFastBac PH,連接穫得暘性質粒命名為pFB/LM-PH.轉化E coli DH10Bac,通過轉座子Tn7的介導,穫得重組桿狀病毒Bv-LM-PH,感染Sf9昆蟲細胞.結果錶明:通過倒置熒光顯微鏡觀察細胞形態及熒光錶達情況；結果證實:感染的Sf9細胞可錶達外源基因eGFP.重組pFB/LM-PH載體具備錶達eGFP的能力,為分子生物學研究提供瞭一種新型可錶達eGFP融閤蛋白的昆蟲桿狀病毒錶達載體.
위구건표체증강형록색형광단백(eGFP)융합단백적곤충간상병독전이재체.이용Sf-9세포표체eGFP,용PCR법종중조Bacmid화pEGFP-C3질립중확증gp64SP、eGFP화VSVGED편단,이용일보법SOE-PCR장3개편단련접재일기.용XbaⅠ화Hind Ⅲ매절융합편단여pFastBac PH,련접획득양성질립명명위pFB/LM-PH.전화E coli DH10Bac,통과전좌자Tn7적개도,획득중조간상병독Bv-LM-PH,감염Sf9곤충세포.결과표명:통과도치형광현미경관찰세포형태급형광표체정황；결과증실:감염적Sf9세포가표체외원기인eGFP.중조pFB/LM-PH재체구비표체eGFP적능력,위분자생물학연구제공료일충신형가표체eGFP융합단백적곤충간상병독표체재체.
