中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2012年
11期
1-5
,共5页
古艳婷%赵婷婷%李平%张浩军%朱斌%韩文兵%董晞%费敏%孙斯凡
古豔婷%趙婷婷%李平%張浩軍%硃斌%韓文兵%董晞%費敏%孫斯凡
고염정%조정정%리평%장호군%주빈%한문병%동희%비민%손사범
二氢生物喋呤还原酶%自噬%糖尿病肾病%LC3%Beclin1
二氫生物喋呤還原酶%自噬%糖尿病腎病%LC3%Beclin1
이경생물첩령환원매%자서%당뇨병신병%LC3%Beclin1
目的 探讨二氢生物喋呤还原酶(dihydropteridine reductase,QDPR)对HEK293T细胞自噬作用的影响.方法 构建野生型QDPR和突变型QDPR重组质粒分别转染HEK293T细胞,并设空载体对照组.采用RT-PCR及Western blot方法检测空载体组,野生型QDPR组和突变型QDPR组自噬相关蛋白LC3和Beclin 1的表达量变化.结果 1)测序结果证实PCR扩增得到编码正常QDPR的cDNA序列正确以及突变的cDNA也在正确的位置突变;2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,野生型QDPR和突变型QDPR融合蛋白成功表达;3)RT-PCR 结果显示,与对照组相比,野生型QDPR组LC3基因水平明显上调(P<0.05),突变型QDPR组LC3基因水平与对照组相比无统计学差异;与对照组相比,野生型和突变型组Beclin1基因水平无统计学差异;4)Western blot结果显示,与对照组相比,野生型QDPR组LC3-II和Beclin1的蛋白表达量明显上调(P<0.05),但LC3-I的蛋白表达量无统计学差异,突变型QDPR组与对照组相比LC3-I,II和Beclin1的蛋白表达量均没有统计学差异(P>0.05).结论 二氢生物喋呤还原酶能增强HEK293T细胞自噬相关基因LC3和Beclin 1的表达,提示其可能具有激活自噬作用的功能;二氢生物喋呤还原酶93位氨基酸的突变影响了其对细胞自噬作用的调控,降低了自噬标志分子LC3-I和Beclin1的基因表达.
目的 探討二氫生物喋呤還原酶(dihydropteridine reductase,QDPR)對HEK293T細胞自噬作用的影響.方法 構建野生型QDPR和突變型QDPR重組質粒分彆轉染HEK293T細胞,併設空載體對照組.採用RT-PCR及Western blot方法檢測空載體組,野生型QDPR組和突變型QDPR組自噬相關蛋白LC3和Beclin 1的錶達量變化.結果 1)測序結果證實PCR擴增得到編碼正常QDPR的cDNA序列正確以及突變的cDNA也在正確的位置突變;2)燐痠鈣共沉澱法轉染HEK293T細胞後,野生型QDPR和突變型QDPR融閤蛋白成功錶達;3)RT-PCR 結果顯示,與對照組相比,野生型QDPR組LC3基因水平明顯上調(P<0.05),突變型QDPR組LC3基因水平與對照組相比無統計學差異;與對照組相比,野生型和突變型組Beclin1基因水平無統計學差異;4)Western blot結果顯示,與對照組相比,野生型QDPR組LC3-II和Beclin1的蛋白錶達量明顯上調(P<0.05),但LC3-I的蛋白錶達量無統計學差異,突變型QDPR組與對照組相比LC3-I,II和Beclin1的蛋白錶達量均沒有統計學差異(P>0.05).結論 二氫生物喋呤還原酶能增彊HEK293T細胞自噬相關基因LC3和Beclin 1的錶達,提示其可能具有激活自噬作用的功能;二氫生物喋呤還原酶93位氨基痠的突變影響瞭其對細胞自噬作用的調控,降低瞭自噬標誌分子LC3-I和Beclin1的基因錶達.
목적 탐토이경생물첩령환원매(dihydropteridine reductase,QDPR)대HEK293T세포자서작용적영향.방법 구건야생형QDPR화돌변형QDPR중조질립분별전염HEK293T세포,병설공재체대조조.채용RT-PCR급Western blot방법검측공재체조,야생형QDPR조화돌변형QDPR조자서상관단백LC3화Beclin 1적표체량변화.결과 1)측서결과증실PCR확증득도편마정상QDPR적cDNA서렬정학이급돌변적cDNA야재정학적위치돌변;2)린산개공침정법전염HEK293T세포후,야생형QDPR화돌변형QDPR융합단백성공표체;3)RT-PCR 결과현시,여대조조상비,야생형QDPR조LC3기인수평명현상조(P<0.05),돌변형QDPR조LC3기인수평여대조조상비무통계학차이;여대조조상비,야생형화돌변형조Beclin1기인수평무통계학차이;4)Western blot결과현시,여대조조상비,야생형QDPR조LC3-II화Beclin1적단백표체량명현상조(P<0.05),단LC3-I적단백표체량무통계학차이,돌변형QDPR조여대조조상비LC3-I,II화Beclin1적단백표체량균몰유통계학차이(P>0.05).결론 이경생물첩령환원매능증강HEK293T세포자서상관기인LC3화Beclin 1적표체,제시기가능구유격활자서작용적공능;이경생물첩령환원매93위안기산적돌변영향료기대세포자서작용적조공,강저료자서표지분자LC3-I화Beclin1적기인표체.
