中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
11期
1102-1106
,共5页
王宇%程金芝%黄江%戴佳琳%陈小睿%廖兴江
王宇%程金芝%黃江%戴佳琳%陳小睿%廖興江
왕우%정금지%황강%대가림%진소예%료흥강
亚洲带绦虫%六钩蚴%基因克隆%原核表达%免疫原性
亞洲帶縚蟲%六鉤蚴%基因剋隆%原覈錶達%免疫原性
아주대조충%륙구유%기인극륭%원핵표체%면역원성
目的 原核克隆表达亚洲带绦虫六钩蚴8 kDa基因(Ta 8),探索其表达蛋白在检测亚洲带绦虫感染中的应用价值.方法 用RT-PCR方法 从亚洲带绦虫六钩蚴cDNA中获取Ta 8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果 均表明pET-28a(+)-Ta 8重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果 表明目的 基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性.结论 成功地构建了亚洲带绦虫六钩蚴8 kDa基因重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中获得了成功表达;证明了8 kDa基因表达产物具有免疫原性;还发现该绦虫成虫的头节、成节、孕节中也存在8 kDa基因.
目的 原覈剋隆錶達亞洲帶縚蟲六鉤蚴8 kDa基因(Ta 8),探索其錶達蛋白在檢測亞洲帶縚蟲感染中的應用價值.方法 用RT-PCR方法 從亞洲帶縚蟲六鉤蚴cDNA中穫取Ta 8基因,剋隆到原覈錶達質粒pET-28a(+)中,在大腸埃希菌BL21/DE3中用IPTG誘導錶達,錶達產物通過SDS-PAGE進行鑒定,用鎳離子金屬螯閤劑親和層析柱進行純化,純化的重組蛋白用蛋白印跡進行免疫學分析.結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果 均錶明pET-28a(+)-Ta 8重組質粒構建成功.SDS-PAGE結果 錶明目的 基因在大腸埃希菌BL21/DE3中穫得高效錶達,親和層析穫得瞭高純度蛋白.重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識彆但不能夠被正常大鼠血清識彆,錶明其具有免疫原性.結論 成功地構建瞭亞洲帶縚蟲六鉤蚴8 kDa基因重組質粒,在大腸埃希菌BL21/DE3中穫得瞭成功錶達;證明瞭8 kDa基因錶達產物具有免疫原性;還髮現該縚蟲成蟲的頭節、成節、孕節中也存在8 kDa基因.
목적 원핵극륭표체아주대조충륙구유8 kDa기인(Ta 8),탐색기표체단백재검측아주대조충감염중적응용개치.방법 용RT-PCR방법 종아주대조충륙구유cDNA중획취Ta 8기인,극륭도원핵표체질립pET-28a(+)중,재대장애희균BL21/DE3중용IPTG유도표체,표체산물통과SDS-PAGE진행감정,용얼리자금속오합제친화층석주진행순화,순화적중조단백용단백인적진행면역학분석.결과 PCR、쌍매절급DNA측서결과 균표명pET-28a(+)-Ta 8중조질립구건성공.SDS-PAGE결과 표명목적 기인재대장애희균BL21/DE3중획득고효표체,친화층석획득료고순도단백.중조단백가피기면역적SD대서혈청식별단불능구피정상대서혈청식별,표명기구유면역원성.결론 성공지구건료아주대조충륙구유8 kDa기인중조질립,재대장애희균BL21/DE3중획득료성공표체;증명료8 kDa기인표체산물구유면역원성;환발현해조충성충적두절、성절、잉절중야존재8 kDa기인.
