畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
3期
387-394
,共8页
崔奎青%张会娜%刘帅%刘晓华%杨素芳%刘庆友%石德顺
崔奎青%張會娜%劉帥%劉曉華%楊素芳%劉慶友%石德順
최규청%장회나%류수%류효화%양소방%류경우%석덕순
沼泽型水牛%NANOG%调控序列%克隆
沼澤型水牛%NANOG%調控序列%剋隆
소택형수우%NANOG%조공서렬%극륭
为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5 ′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312 bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体.应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,并转染水牛胎儿成纤维细胞.结果发现,EGFP的表达仅限于水牛囊胚内细胞团.各缺失体在猪4.5d胚胎中均能启动下游EGFP的表达,转录活性两两之间差异均极显著,按活性从大到小依次为-745、-425、-1 213和-312 bp.各缺失体报告载体转染水牛成纤维细胞48 h后均可见少数细胞发光,其中-425 bp活性极显著高于其他缺失体,-1 213与-745 bp之间无显著差异,二者均极显著高于-312 bp.以上结果说明,水牛NA NOG基因翻译起始位点上游-1 213 bp在水牛囊胚中可以调控NANOG在内细胞团中的特异性表达；-1 213～-745 bp含有多能细胞特异性的抑制子元件；-745～-425 bp含有多能性细胞特异性的增强子元件；-425～-312bp含有非多能细胞特异性的增强子元件.
為探討沼澤型水牛NANOG基因的錶達調控模式,本研究擴增剋隆瞭廣西本地沼澤型水牛NANOG基因的5 ′調控序列片段,設計瞭-1 213、-745、-425和-312 bp 4箇缺失體片段,分彆構建成EGFP報告載體.應用顯微註射報告載體生產轉基因水牛和豬胚胎,併轉染水牛胎兒成纖維細胞.結果髮現,EGFP的錶達僅限于水牛囊胚內細胞糰.各缺失體在豬4.5d胚胎中均能啟動下遊EGFP的錶達,轉錄活性兩兩之間差異均極顯著,按活性從大到小依次為-745、-425、-1 213和-312 bp.各缺失體報告載體轉染水牛成纖維細胞48 h後均可見少數細胞髮光,其中-425 bp活性極顯著高于其他缺失體,-1 213與-745 bp之間無顯著差異,二者均極顯著高于-312 bp.以上結果說明,水牛NA NOG基因翻譯起始位點上遊-1 213 bp在水牛囊胚中可以調控NANOG在內細胞糰中的特異性錶達；-1 213～-745 bp含有多能細胞特異性的抑製子元件；-745～-425 bp含有多能性細胞特異性的增彊子元件；-425～-312bp含有非多能細胞特異性的增彊子元件.
위탐토소택형수우NANOG기인적표체조공모식,본연구확증극륭료엄서본지소택형수우NANOG기인적5 ′조공서렬편단,설계료-1 213、-745、-425화-312 bp 4개결실체편단,분별구건성EGFP보고재체.응용현미주사보고재체생산전기인수우화저배태,병전염수우태인성섬유세포.결과발현,EGFP적표체부한우수우낭배내세포단.각결실체재저4.5d배태중균능계동하유EGFP적표체,전록활성량량지간차이균겁현저,안활성종대도소의차위-745、-425、-1 213화-312 bp.각결실체보고재체전염수우성섬유세포48 h후균가견소수세포발광,기중-425 bp활성겁현저고우기타결실체,-1 213여-745 bp지간무현저차이,이자균겁현저고우-312 bp.이상결과설명,수우NA NOG기인번역기시위점상유-1 213 bp재수우낭배중가이조공NANOG재내세포단중적특이성표체；-1 213～-745 bp함유다능세포특이성적억제자원건；-745～-425 bp함유다능성세포특이성적증강자원건；-425～-312bp함유비다능세포특이성적증강자원건.
