中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
1期
52-55
,共4页
李丹%初阳%刘雅茹%张歧山%秦勇
李丹%初暘%劉雅茹%張歧山%秦勇
리단%초양%류아여%장기산%진용
醛酮还原酶%蛋白纯化%底物特异性
醛酮還原酶%蛋白純化%底物特異性
철동환원매%단백순화%저물특이성
目的 使用FPLC系统纯化人源醛酮还原酶(AKR)7A2融合蛋白,并检测纯化的AKR7A2蛋白对苯的代谢产物的催化活性.方法 将含有His-AKR7A2的重组质粒转化至BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导AKR7A2融合蛋白的大量表达；利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱和G25 Sephadex凝胶色谱柱纯化AKR7A2融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定.采用酶活性实验检测纯化的重组AKR7A2蛋白对苯甲醛、双苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特异性.结果 使用FPLC系统通过两步纯化法成功获得重组的His-AKR7A2融合蛋白,纯度高达98％.酶活性实验结果显示:重组AKR7A2蛋白对苯甲醛有中等亲和力,对MUC亲和力较高,对双苯醌的亲和力较低.结论 成功纯化了重组人源AKR7A2蛋白,并检测了其对3种苯代谢产物的底物特异性,AKR很可能在苯的代谢途径中扮演重要角色.
目的 使用FPLC繫統純化人源醛酮還原酶(AKR)7A2融閤蛋白,併檢測純化的AKR7A2蛋白對苯的代謝產物的催化活性.方法 將含有His-AKR7A2的重組質粒轉化至BL21大腸桿菌,通過IPTG誘導AKR7A2融閤蛋白的大量錶達；利用FPLC繫統通過HiTrap親和柱和G25 Sephadex凝膠色譜柱純化AKR7A2融閤蛋白,經SDS-PAGE和Western blot鑒定.採用酶活性實驗檢測純化的重組AKR7A2蛋白對苯甲醛、雙苯醌和反嚮,反嚮-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特異性.結果 使用FPLC繫統通過兩步純化法成功穫得重組的His-AKR7A2融閤蛋白,純度高達98％.酶活性實驗結果顯示:重組AKR7A2蛋白對苯甲醛有中等親和力,對MUC親和力較高,對雙苯醌的親和力較低.結論 成功純化瞭重組人源AKR7A2蛋白,併檢測瞭其對3種苯代謝產物的底物特異性,AKR很可能在苯的代謝途徑中扮縯重要角色.
목적 사용FPLC계통순화인원철동환원매(AKR)7A2융합단백,병검측순화적AKR7A2단백대분적대사산물적최화활성.방법 장함유His-AKR7A2적중조질립전화지BL21대장간균,통과IPTG유도AKR7A2융합단백적대량표체；이용FPLC계통통과HiTrap친화주화G25 Sephadex응효색보주순화AKR7A2융합단백,경SDS-PAGE화Western blot감정.채용매활성실험검측순화적중조AKR7A2단백대분갑철、쌍분곤화반향,반향-2,4-이희-1,6-기이동(MUC)적저물특이성.결과 사용FPLC계통통과량보순화법성공획득중조적His-AKR7A2융합단백,순도고체98％.매활성실험결과현시:중조AKR7A2단백대분갑철유중등친화력,대MUC친화력교고,대쌍분곤적친화력교저.결론 성공순화료중조인원AKR7A2단백,병검측료기대3충분대사산물적저물특이성,AKR흔가능재분적대사도경중분연중요각색.
