CAJ | 학술논문

为了建立一个简捷有效的抗血清的制备方法,本研究选用猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白基因,使用水流动力学基因免疫的方法制备高效价抗血清的可行性.应用无内提取试剂盒制备猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白基因真核表达载体pcDNA-Cap的无内毒素质粒.将该质粒使用水流动力学尾静脉注射法对小鼠(Mus musculus)进行基因免疫,重复免疫5次后采血收集血清;以原核表达获得的N末端去除了核定位序列的猪圆环病毒核衣壳蛋白表达产物作为抗原蛋白,以制备的小鼠血清作为一抗进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测.结果显示,应用水流动力学尾静脉注射法获得抗血清稀释5000倍通过Western blot至少能够检测到10 ng的抗原蛋白,ELISA分析表明,其效价可达到1∶1000000,说明获得的抗血清具有很好的效价水平.这一研究为猪Ⅱ型圆环病毒相关研究用抗体的制备提供了一个简洁有效的方法,也为猪Ⅱ型圆环病毒的防治方法的建立提供了一个值得尝试的策略.
위료건립일개간첩유효적항혈청적제비방법,본연구선용저Ⅱ형원배병독핵의각단백기인,사용수류동역학기인면역적방법제비고효개항혈청적가행성.응용무내제취시제합제비저Ⅱ형원배병독핵의각단백기인진핵표체재체pcDNA-Cap적무내독소질립.장해질립사용수류동역학미정맥주사법대소서(Mus musculus)진행기인면역,중복면역5차후채혈수집혈청;이원핵표체획득적N말단거제료핵정위서렬적저원배병독핵의각단백표체산물작위항원단백,이제비적소서혈청작위일항진행매련면역흡부시험(ELISA)화Western blot검측.결과현시,응용수류동역학미정맥주사법획득항혈청희석5000배통과Western blot지소능구검측도10 ng적항원단백,ELISA분석표명,기효개가체도1∶1000000,설명획득적항혈청구유흔호적효개수평.저일연구위저Ⅱ형원배병독상관연구용항체적제비제공료일개간길유효적방법,야위저Ⅱ형원배병독적방치방법적건립제공료일개치득상시적책략.