农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
11期
1327-1332
,共6页
亓丽红%朱剑英%艾武%黄兵%于可响%刘涛%秦卓明%宋敏训
亓麗紅%硃劍英%艾武%黃兵%于可響%劉濤%秦卓明%宋敏訓
기려홍%주검영%애무%황병%우가향%류도%진탁명%송민훈
新城疫病毒(NDV)%F基因%鸡白介素(IL-2)%串连真核表达%增强免疫效果
新城疫病毒(NDV)%F基因%鷄白介素(IL-2)%串連真覈錶達%增彊免疫效果
신성역병독(NDV)%F기인%계백개소(IL-2)%천련진핵표체%증강면역효과
为了探索鸡白介素-2(IL-2)对鸡新城疫病毒(NDV)F蛋白免疫效果的增强作用,本研究通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)利用连接子(G2SG3S)将鸡IL-2基因和鸡NDV F基因串连,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了表达质粒pcDNA-IL-2-F.通过脂质体介导DNA瞬时转染法,将重组质粒pcDNA-IL-2-F和pcDNA-F分别转染鸡胚成纤维细胞,Western blot验证表明,pcDNA-IL-2-F和pcDNA-F均能瞬时表达F蛋白,表达蛋白分别为76.0和59.6 kD,表达蛋白的大小与预期一致并具有抗原性.将表达质粒免疫SPF鸡(Gallus domedticus),6d后开始用ELISA方法检测NDV的特异抗体,免疫20 d后,用F48E9进行攻毒.结果显示,免疫pcDNA-IL-2-F的鸡群产生的抗体水平(P＜0.05)高于混合免疫pcDNA-IL-2和pcDNA-F,高于免疫pcDNA-F的鸡群,但比免疫Lasota组的抗体水平要低.攻毒试验说明免疫pcDNA-IL-2-F组比免疫其他质粒组保护率高,这说明串连表达的免疫效果要好于二者的联合使用,为病毒病疫苗的研制提供了思路.
為瞭探索鷄白介素-2(IL-2)對鷄新城疫病毒(NDV)F蛋白免疫效果的增彊作用,本研究通過重疊延伸PCR技術(SOE-PCR)利用連接子(G2SG3S)將鷄IL-2基因和鷄NDV F基因串連,剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+),構建瞭錶達質粒pcDNA-IL-2-F.通過脂質體介導DNA瞬時轉染法,將重組質粒pcDNA-IL-2-F和pcDNA-F分彆轉染鷄胚成纖維細胞,Western blot驗證錶明,pcDNA-IL-2-F和pcDNA-F均能瞬時錶達F蛋白,錶達蛋白分彆為76.0和59.6 kD,錶達蛋白的大小與預期一緻併具有抗原性.將錶達質粒免疫SPF鷄(Gallus domedticus),6d後開始用ELISA方法檢測NDV的特異抗體,免疫20 d後,用F48E9進行攻毒.結果顯示,免疫pcDNA-IL-2-F的鷄群產生的抗體水平(P＜0.05)高于混閤免疫pcDNA-IL-2和pcDNA-F,高于免疫pcDNA-F的鷄群,但比免疫Lasota組的抗體水平要低.攻毒試驗說明免疫pcDNA-IL-2-F組比免疫其他質粒組保護率高,這說明串連錶達的免疫效果要好于二者的聯閤使用,為病毒病疫苗的研製提供瞭思路.
위료탐색계백개소-2(IL-2)대계신성역병독(NDV)F단백면역효과적증강작용,본연구통과중첩연신PCR기술(SOE-PCR)이용련접자(G2SG3S)장계IL-2기인화계NDV F기인천련,극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+),구건료표체질립pcDNA-IL-2-F.통과지질체개도DNA순시전염법,장중조질립pcDNA-IL-2-F화pcDNA-F분별전염계배성섬유세포,Western blot험증표명,pcDNA-IL-2-F화pcDNA-F균능순시표체F단백,표체단백분별위76.0화59.6 kD,표체단백적대소여예기일치병구유항원성.장표체질립면역SPF계(Gallus domedticus),6d후개시용ELISA방법검측NDV적특이항체,면역20 d후,용F48E9진행공독.결과현시,면역pcDNA-IL-2-F적계군산생적항체수평(P＜0.05)고우혼합면역pcDNA-IL-2화pcDNA-F,고우면역pcDNA-F적계군,단비면역Lasota조적항체수평요저.공독시험설명면역pcDNA-IL-2-F조비면역기타질립조보호솔고,저설명천련표체적면역효과요호우이자적연합사용,위병독병역묘적연제제공료사로.
