畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
11期
27-32
,共6页
王霞%陈孝明%范红结%王贵平%李中圣
王霞%陳孝明%範紅結%王貴平%李中聖
왕하%진효명%범홍결%왕귀평%리중골
猪圆环病毒2型%Cap蛋白%分泌表达%免疫原性
豬圓環病毒2型%Cap蛋白%分泌錶達%免疫原性
저원배병독2형%Cap단백%분비표체%면역원성
探索利用杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac expression system)分泌表达猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值.将PCV2 Cap基因克隆到已插入蜂毒信号肽(Melittin)的转移载体pFastBac Ⅰ中,将鉴定正确的重组质粒(pFastBAC-Cap)转化至DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经抗性及蓝白斑筛选得到含Cap基因的重组杆状病毒DNA(Bacmid-Cap),转染提取的Bacmid-Cap DNA转染至sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBac-Cap),应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化.重组蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)证明:在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达,并可产生较高浓度的重组蛋白；Western blotting结果显示:重组蛋白可被猪PCV2的特异性抗体所识别,表明重组蛋白具有反应原性；应用重组蛋白免疫BALB/C小鼠试验结果显示:该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体.该研究成功分泌表达了PCV2 Cap蛋白,该蛋白能够刺激机体产生免疫应答,为PCV2亚单位疫苗的研制打下基础.
探索利用桿狀病毒錶達繫統(Bac-to-Bac expression system)分泌錶達豬圓環病毒2型(PCV2) Cap蛋白及將其作為亞單位疫苗的應用價值.將PCV2 Cap基因剋隆到已插入蜂毒信號肽(Melittin)的轉移載體pFastBac Ⅰ中,將鑒定正確的重組質粒(pFastBAC-Cap)轉化至DH10Bac大腸桿菌感受態細胞,經抗性及藍白斑篩選得到含Cap基因的重組桿狀病毒DNA(Bacmid-Cap),轉染提取的Bacmid-Cap DNA轉染至sf9昆蟲細胞,穫得重組桿狀病毒(rBac-Cap),應用無血清培養的High Five細胞進行重組蛋白的錶達及條件優化.重組蛋白通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分析(SDS-PAGE)證明:在重組桿狀病毒感染的High Five昆蟲細胞中穫得分泌錶達,併可產生較高濃度的重組蛋白；Western blotting結果顯示:重組蛋白可被豬PCV2的特異性抗體所識彆,錶明重組蛋白具有反應原性；應用重組蛋白免疫BALB/C小鼠試驗結果顯示:該蛋白可刺激小鼠產生較高水平的特異性抗體.該研究成功分泌錶達瞭PCV2 Cap蛋白,該蛋白能夠刺激機體產生免疫應答,為PCV2亞單位疫苗的研製打下基礎.
탐색이용간상병독표체계통(Bac-to-Bac expression system)분비표체저원배병독2형(PCV2) Cap단백급장기작위아단위역묘적응용개치.장PCV2 Cap기인극륭도이삽입봉독신호태(Melittin)적전이재체pFastBac Ⅰ중,장감정정학적중조질립(pFastBAC-Cap)전화지DH10Bac대장간균감수태세포,경항성급람백반사선득도함Cap기인적중조간상병독DNA(Bacmid-Cap),전염제취적Bacmid-Cap DNA전염지sf9곤충세포,획득중조간상병독(rBac-Cap),응용무혈청배양적High Five세포진행중조단백적표체급조건우화.중조단백통과취병희선알응효전영분석(SDS-PAGE)증명:재중조간상병독감염적High Five곤충세포중획득분비표체,병가산생교고농도적중조단백；Western blotting결과현시:중조단백가피저PCV2적특이성항체소식별,표명중조단백구유반응원성；응용중조단백면역BALB/C소서시험결과현시:해단백가자격소서산생교고수평적특이성항체.해연구성공분비표체료PCV2 Cap단백,해단백능구자격궤체산생면역응답,위PCV2아단위역묘적연제타하기출.
