畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
11期
17-21
,共5页
牛延萍%高丽丽%宋小凯%徐立新%李祥瑞%严若峰
牛延萍%高麗麗%宋小凱%徐立新%李祥瑞%嚴若峰
우연평%고려려%송소개%서립신%리상서%엄약봉
捻转血矛线虫%排泄分泌抗原%ES24%阶段性表达%实时荧光定量PCR
撚轉血矛線蟲%排洩分泌抗原%ES24%階段性錶達%實時熒光定量PCR
념전혈모선충%배설분비항원%ES24%계단성표체%실시형광정량PCR
根据捻转血矛线虫ES24抗原基因序列(U64793.1)设计1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出大小约为670 bp的DNA片段.将该DNA片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,结果发现该基因与GenBank中已知的捻转血矛线虫24 ku ES抗原基因的相似性达96％～98％.将该基因的开放阅读框插入pET28a(+)载体中,获得原核表达质粒pET28/ES24,并转化大肠杆菌BL21.重组细菌用IPTG诱导,经SDS-PAGE分析,结果表明该基因获得了表达,重组蛋白分子量大小约为25 ku.用实时荧光定量PCR技术对该基因在捻转血矛线虫的虫卵、第3期幼虫、雌虫和雄虫等不同发育阶段、不同性别虫体内的表达情况进行了定量分析,结果显示ES24基因在雄性成虫中表达量最高,雌虫和虫卵其次,在第3期幼虫中表达最低.
根據撚轉血矛線蟲ES24抗原基因序列(U64793.1)設計1對特異性引物,用RT-PCR方法擴增齣大小約為670 bp的DNA片段.將該DNA片段剋隆到pMD18-T載體後進行序列測定和分析,結果髮現該基因與GenBank中已知的撚轉血矛線蟲24 ku ES抗原基因的相似性達96％～98％.將該基因的開放閱讀框插入pET28a(+)載體中,穫得原覈錶達質粒pET28/ES24,併轉化大腸桿菌BL21.重組細菌用IPTG誘導,經SDS-PAGE分析,結果錶明該基因穫得瞭錶達,重組蛋白分子量大小約為25 ku.用實時熒光定量PCR技術對該基因在撚轉血矛線蟲的蟲卵、第3期幼蟲、雌蟲和雄蟲等不同髮育階段、不同性彆蟲體內的錶達情況進行瞭定量分析,結果顯示ES24基因在雄性成蟲中錶達量最高,雌蟲和蟲卵其次,在第3期幼蟲中錶達最低.
근거념전혈모선충ES24항원기인서렬(U64793.1)설계1대특이성인물,용RT-PCR방법확증출대소약위670 bp적DNA편단.장해DNA편단극륭도pMD18-T재체후진행서렬측정화분석,결과발현해기인여GenBank중이지적념전혈모선충24 ku ES항원기인적상사성체96％～98％.장해기인적개방열독광삽입pET28a(+)재체중,획득원핵표체질립pET28/ES24,병전화대장간균BL21.중조세균용IPTG유도,경SDS-PAGE분석,결과표명해기인획득료표체,중조단백분자량대소약위25 ku.용실시형광정량PCR기술대해기인재념전혈모선충적충란、제3기유충、자충화웅충등불동발육계단、불동성별충체내적표체정황진행료정량분석,결과현시ES24기인재웅성성충중표체량최고,자충화충란기차,재제3기유충중표체최저.
