CAJ | 학술논문

寻找一种适合牛胚胎干细胞生长的饲养层对成功培育牛胚胎干细胞有重要意义.本研究采用不同浓度国产丝裂霉素处理的SIM小鼠(Mus musculus)成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系(STO细胞)作为饲养层培养牛胚胎干细胞,为牛胚胎干细胞培养体系的建立提供实验依据.用10、15、20、30和40 μg/mL国产丝裂霉素分别处理1.5、3.0和4.0 h的STO细胞;形态学观察不同代次STO细胞生长状态,并对生长在以STO细胞为饲养层的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色(AKP)、阶段特异性胚胎细胞表面抗原-4(OCT-4)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)免疫组化检测、体外分化形成拟胚体等实验.结果显示,当丝裂霉素的浓度为15 μg/mL处理3.0 h可有效的抑制细胞分裂;STO细胞在5～10代作为饲养层细胞形态最好且获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT-4和SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体.结果证明使用国产丝裂霉素能有效地处理STO细胞且在以STO细胞作为饲养层培养的牛胚胎干细胞能保持未分化状态,可以作为常规饲养层培养牛胚胎干细胞.
심조일충괄합우배태간세포생장적사양층대성공배육우배태간세포유중요의의.본연구채용불동농도국산사렬매소처리적SIM소서(Mus musculus)성섬유세포내류대조표령화내조분감아계(STO세포)작위사양층배양우배태간세포,위우배태간세포배양체계적건립제공실험의거.용10、15、20、30화40 μg/mL국산사렬매소분별처리1.5、3.0화4.0 h적STO세포;형태학관찰불동대차STO세포생장상태,병대생장재이STO세포위사양층적우배태간세포진행감성린산매염색(AKP)、계단특이성배태세포표면항원-4(OCT-4)화계단특이성배태항원-1(SSEA-1)면역조화검측、체외분화형성의배체등실험.결과현시,당사렬매소적농도위15 μg/mL처리3.0 h가유효적억제세포분렬;STO세포재5～10대작위사양층세포형태최호차획득적우배태간세포AKP염색급OCT-4화SSEA-1항원표체균성양성,분별재체외분화배양형성료의배체.결과증명사용국산사렬매소능유효지처리STO세포차재이STO세포작위사양층배양적우배태간세포능보지미분화상태,가이작위상규사양층배양우배태간세포.