中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2013年
1期
25-32
,共8页
赵静%赵金银%赵肖%陈唯军%钟巍%张力%李龙芸%王孟昭
趙靜%趙金銀%趙肖%陳唯軍%鐘巍%張力%李龍蕓%王孟昭
조정%조금은%조초%진유군%종외%장력%리룡예%왕맹소
扩增阻滞突变系统%Taqman探针%表皮生长因子受体%突变检测%肺肿瘤
擴增阻滯突變繫統%Taqman探針%錶皮生長因子受體%突變檢測%肺腫瘤
확증조체돌변계통%Taqman탐침%표피생장인자수체%돌변검측%폐종류
背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是决定表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)疗效最重要的预测因子,对EGFR基因突变进行检测,对指导患者个体化治疗具有重要意义.EGFR基因突变检测方法有很多,每种方法各有优缺点,本研究拟采用扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)技术与Taqman探针相结合的方法,建立一种能快速、敏感及特异检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的方法.方法 首先,应用Primer Premier 5.0软件在EGFR基因E746 A750和L858R处设计ARMS引物及Taqman水解探针.然后,以包含E746_A750缺失和L858R点突变的质粒为研究对象,进一步分析所建立方法的灵敏度、敏感性以及特异性.最后,用所建立的ARMS-Taqman法检测100例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床标本.结果 在无背景DNA干扰的情况下,ARMS-Taqman法检测灵敏度可达10 copies.对于检测敏感性,在500 copies/μL野生型基因背景下,其敏感性达1％；在5,000 copies/μl野生型基因背景下,其敏感性高达0.1％-0.5％.对于检测特异性,以正常人白细胞DNA为研究对象,21 L858R突变存在一定程度的非特异性扩增,但其最小ΔCt高达14.89,而19 Del未见非特异性扩增.对100份临床标本进行检测,19 Del 21例,21 L858R 18例,总突变率为39.0％.结论 我们所构建的ARMS-Taqman法是一种快速、简便以及具有较高灵敏度和特异性的EGFR基因突变检测方法,值得在临床上进一步推广和验证.
揹景與目的 錶皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突變是決定錶皮生長因子受體酪氨痠激酶抑製劑(EGFR tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)療效最重要的預測因子,對EGFR基因突變進行檢測,對指導患者箇體化治療具有重要意義.EGFR基因突變檢測方法有很多,每種方法各有優缺點,本研究擬採用擴增阻滯突變繫統(amplification refractory mutation system,ARMS)技術與Taqman探針相結閤的方法,建立一種能快速、敏感及特異檢測非小細胞肺癌EGFR基因突變的方法.方法 首先,應用Primer Premier 5.0軟件在EGFR基因E746 A750和L858R處設計ARMS引物及Taqman水解探針.然後,以包含E746_A750缺失和L858R點突變的質粒為研究對象,進一步分析所建立方法的靈敏度、敏感性以及特異性.最後,用所建立的ARMS-Taqman法檢測100例非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)臨床標本.結果 在無揹景DNA榦擾的情況下,ARMS-Taqman法檢測靈敏度可達10 copies.對于檢測敏感性,在500 copies/μL野生型基因揹景下,其敏感性達1％；在5,000 copies/μl野生型基因揹景下,其敏感性高達0.1％-0.5％.對于檢測特異性,以正常人白細胞DNA為研究對象,21 L858R突變存在一定程度的非特異性擴增,但其最小ΔCt高達14.89,而19 Del未見非特異性擴增.對100份臨床標本進行檢測,19 Del 21例,21 L858R 18例,總突變率為39.0％.結論 我們所構建的ARMS-Taqman法是一種快速、簡便以及具有較高靈敏度和特異性的EGFR基因突變檢測方法,值得在臨床上進一步推廣和驗證.
배경여목적 표피생장인자수체(epidermal growth factor receptor,EGFR)기인돌변시결정표피생장인자수체락안산격매억제제(EGFR tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)료효최중요적예측인자,대EGFR기인돌변진행검측,대지도환자개체화치료구유중요의의.EGFR기인돌변검측방법유흔다,매충방법각유우결점,본연구의채용확증조체돌변계통(amplification refractory mutation system,ARMS)기술여Taqman탐침상결합적방법,건립일충능쾌속、민감급특이검측비소세포폐암EGFR기인돌변적방법.방법 수선,응용Primer Premier 5.0연건재EGFR기인E746 A750화L858R처설계ARMS인물급Taqman수해탐침.연후,이포함E746_A750결실화L858R점돌변적질립위연구대상,진일보분석소건립방법적령민도、민감성이급특이성.최후,용소건립적ARMS-Taqman법검측100례비소세포폐암(non-small cell lung cancer,NSCLC)림상표본.결과 재무배경DNA간우적정황하,ARMS-Taqman법검측령민도가체10 copies.대우검측민감성,재500 copies/μL야생형기인배경하,기민감성체1％；재5,000 copies/μl야생형기인배경하,기민감성고체0.1％-0.5％.대우검측특이성,이정상인백세포DNA위연구대상,21 L858R돌변존재일정정도적비특이성확증,단기최소ΔCt고체14.89,이19 Del미견비특이성확증.대100빈림상표본진행검측,19 Del 21례,21 L858R 18례,총돌변솔위39.0％.결론 아문소구건적ARMS-Taqman법시일충쾌속、간편이급구유교고령민도화특이성적EGFR기인돌변검측방법,치득재림상상진일보추엄화험증.
