中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2013年
1期
7-11
,共5页
祁秋干%周清华%李印%李伟强%陈霏%秦建军
祁鞦榦%週清華%李印%李偉彊%陳霏%秦建軍
기추간%주청화%리인%리위강%진비%진건군
人骨髓间充质干细胞%IL-24%EGFP%基因转导%慢病毒载体
人骨髓間充質榦細胞%IL-24%EGFP%基因轉導%慢病毒載體
인골수간충질간세포%IL-24%EGFP%기인전도%만병독재체
背景与目的 以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道.应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒载体,探讨其对hBMSCs的转导情况,为今后肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 应用DNA重组技术构建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒表达载体,并与慢病毒包装系统(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞,收集上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度.取重组慢病毒感染hBMSCs,通过嘌呤霉素筛选并纯化hBMSCs,应用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分别检测hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的表达情况.结果 成功构建了共表达IL-24和EGFP基因的重组慢病毒载体,经包装、纯化及浓缩,病毒滴度为7.25× 107 PFU/mL.重组慢病毒转导hBMSCs后,通过筛选获得纯化,转导效率可达到100％.qPCR检测示:转导组IL-24 mRNA表达明显高于未转导组(P＜0.05)；ELISA法检测显示转导组hBMSCs上清液IL-24蛋白表达40 μg/L,未转导组为阴性.结论 构建的携带IL-24基因的重组慢病毒载体可有效转导hBMSCs,表达IL-24蛋白.
揹景與目的 以人骨髓間充質榦細胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作為抑癌基因IL-24的細胞載體的研究目前未見報道.應用Gateway法構建共錶達增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒載體,探討其對hBMSCs的轉導情況,為今後腫瘤的基因治療奠定基礎.方法 應用DNA重組技術構建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒錶達載體,併與慢病毒包裝繫統(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共轉染293FT細胞,收集上清,純化濃縮,測定重組病毒的滴度.取重組慢病毒感染hBMSCs,通過嘌呤黴素篩選併純化hBMSCs,應用實時熒光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分彆檢測hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的錶達情況.結果 成功構建瞭共錶達IL-24和EGFP基因的重組慢病毒載體,經包裝、純化及濃縮,病毒滴度為7.25× 107 PFU/mL.重組慢病毒轉導hBMSCs後,通過篩選穫得純化,轉導效率可達到100％.qPCR檢測示:轉導組IL-24 mRNA錶達明顯高于未轉導組(P＜0.05)；ELISA法檢測顯示轉導組hBMSCs上清液IL-24蛋白錶達40 μg/L,未轉導組為陰性.結論 構建的攜帶IL-24基因的重組慢病毒載體可有效轉導hBMSCs,錶達IL-24蛋白.
배경여목적 이인골수간충질간세포(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)작위억암기인IL-24적세포재체적연구목전미견보도.응용Gateway법구건공표체증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,EGFP)기인화IL-24기인적만병독재체,탐토기대hBMSCs적전도정황,위금후종류적기인치료전정기출.방법 응용DNA중조기술구건함유IL-24화EGFP기인적만병독표체재체,병여만병독포장계통(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)공전염293FT세포,수집상청,순화농축,측정중조병독적적도.취중조만병독감염hBMSCs,통과표령매소사선병순화hBMSCs,응용실시형광정량PCR(quantitative PCR,qPCR)급ELISA법분별검측hBMSCs중IL-24mRNA급IL-24단백수평적표체정황.결과 성공구건료공표체IL-24화EGFP기인적중조만병독재체,경포장、순화급농축,병독적도위7.25× 107 PFU/mL.중조만병독전도hBMSCs후,통과사선획득순화,전도효솔가체도100％.qPCR검측시:전도조IL-24 mRNA표체명현고우미전도조(P＜0.05)；ELISA법검측현시전도조hBMSCs상청액IL-24단백표체40 μg/L,미전도조위음성.결론 구건적휴대IL-24기인적중조만병독재체가유효전도hBMSCs,표체IL-24단백.
