军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2013年
4期
250-253
,共4页
罗森%王琴%房华丽%王德慧%李崭%李涛%王慧
囉森%王琴%房華麗%王德慧%李嶄%李濤%王慧
라삼%왕금%방화려%왕덕혜%리참%리도%왕혜
囊泡相关膜蛋白质2%金属内肽酶%底物%原核表达
囊泡相關膜蛋白質2%金屬內肽酶%底物%原覈錶達
낭포상관막단백질2%금속내태매%저물%원핵표체
目的 克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性.方法 根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因.将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3) Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定.结果 与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达.重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性.
目的 剋隆突觸小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原覈錶達、純化併鑒定重組蛋白VAMP-2活性.方法 根據GenBank中已報道的VAMP-2基因序列,設計特異性引物,通過RT-PCR從小鼠的全腦組織總RNA中穫得基因.將去疏水區後的基因剋隆至含有N耑信號肽pelB序列的原覈錶達載體pET-22b中,重組質粒轉化BL21(DE3) Rosetta感受態細胞,IPTG誘導錶達,錶達產物經Ni-NTA親和層析純化,SDS-PAGE及Western印跡進行鑒定,併利用金屬內肽酶BoNT/B輕鏈對該蛋白進行生物活性分析和酶活動力學測定.結果 與結論成功構建pET-22b-VAMP-2錶達質粒,併轉化大腸桿菌BL21(DE3)Rosetta,Western印跡證實重組蛋白VAMP-2(殘基Met 1-Met 94)穫得可溶性錶達.重組蛋白VAMP-2可被金屬內肽酶BoNT/B特異性酶解,具有良好的生物學活性.
목적 극륭돌촉소포막단백(VAMP-2)기인,원핵표체、순화병감정중조단백VAMP-2활성.방법 근거GenBank중이보도적VAMP-2기인서렬,설계특이성인물,통과RT-PCR종소서적전뇌조직총RNA중획득기인.장거소수구후적기인극륭지함유N단신호태pelB서렬적원핵표체재체pET-22b중,중조질립전화BL21(DE3) Rosetta감수태세포,IPTG유도표체,표체산물경Ni-NTA친화층석순화,SDS-PAGE급Western인적진행감정,병이용금속내태매BoNT/B경련대해단백진행생물활성분석화매활동역학측정.결과 여결론성공구건pET-22b-VAMP-2표체질립,병전화대장간균BL21(DE3)Rosetta,Western인적증실중조단백VAMP-2(잔기Met 1-Met 94)획득가용성표체.중조단백VAMP-2가피금속내태매BoNT/B특이성매해,구유량호적생물학활성.
