宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2013年
3期
240-243
,共4页
张瑞芹%汤建中%贾伟%魏军%张一琳%徐广贤
張瑞芹%湯建中%賈偉%魏軍%張一琳%徐廣賢
장서근%탕건중%가위%위군%장일림%서엄현
结核分枝杆菌%PPE37%基因克隆%原核表达
結覈分枝桿菌%PPE37%基因剋隆%原覈錶達
결핵분지간균%PPE37%기인극륭%원핵표체
目的 构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达.方法 以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA 为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒.经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE及Western Blot对表达产物进行鉴定.结果 PCR法扩增出约1600bp的条带.重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致.重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确.SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应.结论 成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础.
目的 構建結覈分枝桿菌ppe37基因的重組原覈錶達質粒,併將其轉化到E.coli BL21中誘導錶達.方法 以結覈分枝桿菌國際標準株H37Rv基因組DNA 為模闆,PCR法擴增ppe37基因,將其剋隆至pEasyE2剋隆載體中,構建pEasyE2-ppe37重組質粒.經雙酶切後將ppe37基因片段亞剋隆到pET30a載體中,構建重組原覈錶達質粒pET30a-ppe37,併轉化到大腸桿菌BL21中,經IPTG誘導錶達.利用SDS-PAGE及Western Blot對錶達產物進行鑒定.結果 PCR法擴增齣約1600bp的條帶.重組質粒pEasyE2-ppe37經PCR及雙酶切鑒定構建正確,測序結果與GenBank中登錄的PPE37蛋白基因序列一緻.重組原覈錶達質粒pET30a-ppe37經PCR及雙酶切鑒定構建正確.SDS-PAGE鑒定錶達的組氨痠標籤重組蛋白相對分子質量約為50KDa,Western blot驗證重組蛋白可與抗組氨痠單抗髮生特異性反應.結論 成功構建結覈分枝桿菌ppe37基因重組原覈錶達質粒pET30a-ppe37,併成功誘導錶達,為PPE37蛋白作為結覈病特異性診斷抗原的開髮奠定瞭基礎.
목적 구건결핵분지간균ppe37기인적중조원핵표체질립,병장기전화도E.coli BL21중유도표체.방법 이결핵분지간균국제표준주H37Rv기인조DNA 위모판,PCR법확증ppe37기인,장기극륭지pEasyE2극륭재체중,구건pEasyE2-ppe37중조질립.경쌍매절후장ppe37기인편단아극륭도pET30a재체중,구건중조원핵표체질립pET30a-ppe37,병전화도대장간균BL21중,경IPTG유도표체.이용SDS-PAGE급Western Blot대표체산물진행감정.결과 PCR법확증출약1600bp적조대.중조질립pEasyE2-ppe37경PCR급쌍매절감정구건정학,측서결과여GenBank중등록적PPE37단백기인서렬일치.중조원핵표체질립pET30a-ppe37경PCR급쌍매절감정구건정학.SDS-PAGE감정표체적조안산표첨중조단백상대분자질량약위50KDa,Western blot험증중조단백가여항조안산단항발생특이성반응.결론 성공구건결핵분지간균ppe37기인중조원핵표체질립pET30a-ppe37,병성공유도표체,위PPE37단백작위결핵병특이성진단항원적개발전정료기출.
