浙江农林大学学报
浙江農林大學學報
절강농림대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG FORESTRY COLLEGE
2013年
6期
844-851
,共8页
吴月燕%陶巧静%李波%许丹叶
吳月燕%陶巧靜%李波%許丹葉
오월연%도교정%리파%허단협
植物学%西洋杜鹃%遗传多样性%SRAP-PCR%正交设计%体系优化%聚类分析
植物學%西洋杜鵑%遺傳多樣性%SRAP-PCR%正交設計%體繫優化%聚類分析
식물학%서양두견%유전다양성%SRAP-PCR%정교설계%체계우화%취류분석
botany%Rhododendron hybridum%genetic diversity%SRAP-PCR%orthogonal design%system optimization%cluster analysis
以西洋杜鹃Rhododendron hybridum功能叶片为试验材料,采用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取西洋杜鹃基因组DNA,并且运用L16(44)正交试验设计,在4个水平上对影响西洋杜鹃相关序列扩增多态性(SRAP)反应的镁离子(Mg2+)浓度、Taq酶用量、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度等4个因素进行了优化,确立了一套适用于西洋杜鹃的稳定可靠、重复性强的SRAP-PCR反应体系.实验发现,其最佳反应体系(20.0 μL)为:Mg2+浓度1.750 mmol·L-1,dNTPs浓度0.175 mmolL-1,Taq酶1.500×16.67 nkat,引物0.200 μmolL-1.利用该优化体系对24个西洋杜鹃花品种进行遗传多样性分析.从88对SRAP引物中筛选出10对扩增清晰且多态性高的引物,共扩增出217条带,其中多态性条带212条,多态性比率达97.35％.24个杜鹃品种的遗传相似系数变化范围为0.591～0.708,算术平均数的非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析结果显示:在相似系数为0.590处将24个供试品种分为2个类群,在相似系数为0.623处又可分为2个亚群,说明该优化体系可应用于西洋杜鹃花品种鉴定及遗传多样性的研究.
以西洋杜鵑Rhododendron hybridum功能葉片為試驗材料,採用改良的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法提取西洋杜鵑基因組DNA,併且運用L16(44)正交試驗設計,在4箇水平上對影響西洋杜鵑相關序列擴增多態性(SRAP)反應的鎂離子(Mg2+)濃度、Taq酶用量、三燐痠堿基脫氧覈苷痠(dNTPs)濃度、引物濃度等4箇因素進行瞭優化,確立瞭一套適用于西洋杜鵑的穩定可靠、重複性彊的SRAP-PCR反應體繫.實驗髮現,其最佳反應體繫(20.0 μL)為:Mg2+濃度1.750 mmol·L-1,dNTPs濃度0.175 mmolL-1,Taq酶1.500×16.67 nkat,引物0.200 μmolL-1.利用該優化體繫對24箇西洋杜鵑花品種進行遺傳多樣性分析.從88對SRAP引物中篩選齣10對擴增清晰且多態性高的引物,共擴增齣217條帶,其中多態性條帶212條,多態性比率達97.35％.24箇杜鵑品種的遺傳相似繫數變化範圍為0.591～0.708,算術平均數的非加權配對算術平均法(UPGMA)聚類分析結果顯示:在相似繫數為0.590處將24箇供試品種分為2箇類群,在相似繫數為0.623處又可分為2箇亞群,說明該優化體繫可應用于西洋杜鵑花品種鑒定及遺傳多樣性的研究.
이서양두견Rhododendron hybridum공능협편위시험재료,채용개량적십륙완기삼갑기추화안(CTAB)법제취서양두견기인조DNA,병차운용L16(44)정교시험설계,재4개수평상대영향서양두견상관서렬확증다태성(SRAP)반응적미리자(Mg2+)농도、Taq매용량、삼린산감기탈양핵감산(dNTPs)농도、인물농도등4개인소진행료우화,학립료일투괄용우서양두견적은정가고、중복성강적SRAP-PCR반응체계.실험발현,기최가반응체계(20.0 μL)위:Mg2+농도1.750 mmol·L-1,dNTPs농도0.175 mmolL-1,Taq매1.500×16.67 nkat,인물0.200 μmolL-1.이용해우화체계대24개서양두견화품충진행유전다양성분석.종88대SRAP인물중사선출10대확증청석차다태성고적인물,공확증출217조대,기중다태성조대212조,다태성비솔체97.35％.24개두견품충적유전상사계수변화범위위0.591～0.708,산술평균수적비가권배대산술평균법(UPGMA)취류분석결과현시:재상사계수위0.590처장24개공시품충분위2개류군,재상사계수위0.623처우가분위2개아군,설명해우화체계가응용우서양두견화품충감정급유전다양성적연구.
