上海农业学报
上海農業學報
상해농업학보
ACTA AGRICULTURAE SHANGHAI
2013年
6期
20-23
,共4页
何晓兰%许玲%徐照龙%卫陪陪%刘晓庆%黄益洪%张大勇
何曉蘭%許玲%徐照龍%衛陪陪%劉曉慶%黃益洪%張大勇
하효란%허령%서조룡%위배배%류효경%황익홍%장대용
大豆%根%酵母双杂交文库%耐盐性%互作蛋白
大豆%根%酵母雙雜交文庫%耐鹽性%互作蛋白
대두%근%효모쌍잡교문고%내염성%호작단백
Soybean%Root%Yeast two-hybrid system%Salt tolerance%Interaction proteins
为了高效研究大豆耐非生物胁迫的分子调控网络,运用SMART(Switching Mechanism at 5'End ofthe RNA Transcript)与DSN (Duplex-Specific Nulease)相结合的技术构建了栽培大豆高盐胁迫下根部组织的酵母双杂交cDNA文库.提取高质量的总RNA,利用Oligo (dT)16引物反转录合成cDNA后,经DSN处理,然后利用Advantage 2聚合酶进行长片段PCR扩增,电泳检测显示,产物均一,无高丰度条带,片段范围在0.75～5.00 kb;RT-PCR结果显示,GmActin基因在均一化后表达明显降低,表明均一化效果较好;最后通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株Y187中构建了酵母双杂交所需的cDNA文库.文库质量检测结果表明:cDNA文库的总独立克隆数为5.61×106c fu、文库滴度为3.4×1010cfu/mL、重组率大于90％、插入片段长度为0.5～3.0 kb,主要集中在1.0 kb左右.
為瞭高效研究大豆耐非生物脅迫的分子調控網絡,運用SMART(Switching Mechanism at 5'End ofthe RNA Transcript)與DSN (Duplex-Specific Nulease)相結閤的技術構建瞭栽培大豆高鹽脅迫下根部組織的酵母雙雜交cDNA文庫.提取高質量的總RNA,利用Oligo (dT)16引物反轉錄閤成cDNA後,經DSN處理,然後利用Advantage 2聚閤酶進行長片段PCR擴增,電泳檢測顯示,產物均一,無高豐度條帶,片段範圍在0.75～5.00 kb;RT-PCR結果顯示,GmActin基因在均一化後錶達明顯降低,錶明均一化效果較好;最後通過SMART同源重組交換技術在酵母菌株Y187中構建瞭酵母雙雜交所需的cDNA文庫.文庫質量檢測結果錶明:cDNA文庫的總獨立剋隆數為5.61×106c fu、文庫滴度為3.4×1010cfu/mL、重組率大于90％、插入片段長度為0.5～3.0 kb,主要集中在1.0 kb左右.
위료고효연구대두내비생물협박적분자조공망락,운용SMART(Switching Mechanism at 5'End ofthe RNA Transcript)여DSN (Duplex-Specific Nulease)상결합적기술구건료재배대두고염협박하근부조직적효모쌍잡교cDNA문고.제취고질량적총RNA,이용Oligo (dT)16인물반전록합성cDNA후,경DSN처리,연후이용Advantage 2취합매진행장편단PCR확증,전영검측현시,산물균일,무고봉도조대,편단범위재0.75～5.00 kb;RT-PCR결과현시,GmActin기인재균일화후표체명현강저,표명균일화효과교호;최후통과SMART동원중조교환기술재효모균주Y187중구건료효모쌍잡교소수적cDNA문고.문고질량검측결과표명:cDNA문고적총독립극륭수위5.61×106c fu、문고적도위3.4×1010cfu/mL、중조솔대우90％、삽입편단장도위0.5～3.0 kb,주요집중재1.0 kb좌우.
