江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
1386-1392
,共7页
蒋香菊%吴阳升%林嘉鹏%汪立芹%张利%古丽米热·阿不都热依木%杨楠%刘莉%黄俊成
蔣香菊%吳暘升%林嘉鵬%汪立芹%張利%古麗米熱·阿不都熱依木%楊楠%劉莉%黃俊成
장향국%오양승%림가붕%왕립근%장리%고려미열·아불도열의목%양남%류리%황준성
绵羊%AMH基因%序列分析%原核表达
綿羊%AMH基因%序列分析%原覈錶達
면양%AMH기인%서렬분석%원핵표체
sheep%AMH gene%sequence analysis%prokaryotic expression
旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析.以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析.根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15 b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80％.SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致.Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白.以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
旨在剋隆綿羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全長編碼區序列,併對其序列進行分析.以綿羊的卵泡顆粒細胞全RNA逆轉錄得到的cDNA為模闆,參照牛的AMH cDNA序列設計兼併引物,對oAMH基因的全長編碼區進行T載體剋隆併測序,併對其進行生物信息學分析.根據預測的編碼區氨基末耑260氨基痠對應的序列設計錶達引物,構建原覈錶達載體pET15 b-oamh260,轉化BL21(DE3)菌,經IPTG誘導,對錶達產物進行SDS-PAGE和Western blot鑒定.序列分析結果錶明,穫得的綿羊AMH基因序列全長1 797 bp(GenBank登錄號:KC986978),完整開放閱讀框為1 728 bp,共編碼575箇氨基痠,氨基末耑24箇氨基痠為信號肽序列,羧基末耑區域TGFβ傢族保守區,全序列與牛AMH的同源性為95.80％.SDS-PAGE結果顯示,IPTG誘導錶達的融閤蛋白大小為30 000,與預期蛋白質大小一緻.Western blot檢測結果顯示,該蛋白質為His融閤蛋白.以上結果錶明該試驗成功剋隆瞭綿羊AMH基因的完整編碼區序列,構建瞭原覈錶達載體,在大腸桿菌中成功錶達齣目的融閤蛋白,為進一步研究其生物學功能奠定瞭基礎.
지재극륭면양항묘륵관격소기인(oAMH)적전장편마구서렬,병대기서렬진행분석.이면양적란포과립세포전RNA역전록득도적cDNA위모판,삼조우적AMH cDNA서렬설계겸병인물,대oAMH기인적전장편마구진행T재체극륭병측서,병대기진행생물신식학분석.근거예측적편마구안기말단260안기산대응적서렬설계표체인물,구건원핵표체재체pET15 b-oamh260,전화BL21(DE3)균,경IPTG유도,대표체산물진행SDS-PAGE화Western blot감정.서렬분석결과표명,획득적면양AMH기인서렬전장1 797 bp(GenBank등록호:KC986978),완정개방열독광위1 728 bp,공편마575개안기산,안기말단24개안기산위신호태서렬,최기말단구역TGFβ가족보수구,전서렬여우AMH적동원성위95.80％.SDS-PAGE결과현시,IPTG유도표체적융합단백대소위30 000,여예기단백질대소일치.Western blot검측결과현시,해단백질위His융합단백.이상결과표명해시험성공극륭료면양AMH기인적완정편마구서렬,구건료원핵표체재체,재대장간균중성공표체출목적융합단백,위진일보연구기생물학공능전정료기출.
