江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
1304-1312
,共9页
刘怀阿%苏建坤%刘琴%李婷%杨钟灵%蒋欢
劉懷阿%囌建坤%劉琴%李婷%楊鐘靈%蔣歡
류부아%소건곤%류금%리정%양종령%장환
胡萝卜软腐果胶杆菌%mariner转座子%诱导表达%基因敲除%功能分析
鬍蘿蔔軟腐果膠桿菌%mariner轉座子%誘導錶達%基因敲除%功能分析
호라복연부과효간균%mariner전좌자%유도표체%기인고제%공능분석
Pectobacterterium carotovorum subsp.Carotovorum%mariner transposons%inducible expression%gene knockout%functional analysis
利用含有无启动子的Km抗性基因的转座子mariner对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc)菌株PccS1进行转座诱变,建立突变体文库,以白花马蹄莲组织提取液为诱导物,诱导突变菌株,鉴定突变、并验证.筛选获得1株受白花马蹄莲组织提取液诱导的突变株PM5,经亚克隆鉴定,转座子插入位点为辅酶Q氧甲基转移合成酶ubiG基因(Ubiquinone biosynthesis O-methyltransferase).利用同源重组获得该基因的缺失突变体△ubiG.与野生型相比,△ubiG对不同寄主的致病性均减弱(黄花马蹄莲和白花马蹄莲上的病斑面积减半,大白菜的病斑面积仅为1/5);突变菌株菌体沉降速率明显加快,生物膜产量降低约50%,无胞外蛋白酶产生.此外,△ubiG对链霉素和新霉素抗性分别比野生型增强了2.0倍和26.5倍,突变菌株的相关功能经互补可以部分恢复.以上结果说明,ubiG基因可被白花马蹄莲诱导并参与胡萝卜软腐杆菌的致病作用.
利用含有無啟動子的Km抗性基因的轉座子mariner對鬍蘿蔔軟腐果膠桿菌鬍蘿蔔亞種(Pectobacterterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc)菌株PccS1進行轉座誘變,建立突變體文庫,以白花馬蹄蓮組織提取液為誘導物,誘導突變菌株,鑒定突變、併驗證.篩選穫得1株受白花馬蹄蓮組織提取液誘導的突變株PM5,經亞剋隆鑒定,轉座子插入位點為輔酶Q氧甲基轉移閤成酶ubiG基因(Ubiquinone biosynthesis O-methyltransferase).利用同源重組穫得該基因的缺失突變體△ubiG.與野生型相比,△ubiG對不同寄主的緻病性均減弱(黃花馬蹄蓮和白花馬蹄蓮上的病斑麵積減半,大白菜的病斑麵積僅為1/5);突變菌株菌體沉降速率明顯加快,生物膜產量降低約50%,無胞外蛋白酶產生.此外,△ubiG對鏈黴素和新黴素抗性分彆比野生型增彊瞭2.0倍和26.5倍,突變菌株的相關功能經互補可以部分恢複.以上結果說明,ubiG基因可被白花馬蹄蓮誘導併參與鬍蘿蔔軟腐桿菌的緻病作用.
이용함유무계동자적Km항성기인적전좌자mariner대호라복연부과효간균호라복아충(Pectobacterterium carotovorum subsp.carotovorum,Pcc)균주PccS1진행전좌유변,건립돌변체문고,이백화마제련조직제취액위유도물,유도돌변균주,감정돌변、병험증.사선획득1주수백화마제련조직제취액유도적돌변주PM5,경아극륭감정,전좌자삽입위점위보매Q양갑기전이합성매ubiG기인(Ubiquinone biosynthesis O-methyltransferase).이용동원중조획득해기인적결실돌변체△ubiG.여야생형상비,△ubiG대불동기주적치병성균감약(황화마제련화백화마제련상적병반면적감반,대백채적병반면적부위1/5);돌변균주균체침강속솔명현가쾌,생물막산량강저약50%,무포외단백매산생.차외,△ubiG대련매소화신매소항성분별비야생형증강료2.0배화26.5배,돌변균주적상관공능경호보가이부분회복.이상결과설명,ubiG기인가피백화마제련유도병삼여호라복연부간균적치병작용.