中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2013年
12期
942-946
,共5页
牛卫卫%白华%王进文%颜世敢%齐静%骆延波%李璐璐%贾纪美%李靖冉
牛衛衛%白華%王進文%顏世敢%齊靜%駱延波%李璐璐%賈紀美%李靖冉
우위위%백화%왕진문%안세감%제정%락연파%리로로%가기미%리정염
lexA%SOS应答%大肠埃希菌%恩诺沙星%抗药性突变%质粒过表达
lexA%SOS應答%大腸埃希菌%恩諾沙星%抗藥性突變%質粒過錶達
lexA%SOS응답%대장애희균%은낙사성%항약성돌변%질립과표체
lexA%SOS response%Escherichia coli%Enrofloxacin%Resistance mutation%Plasmid overexpression
目的 构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台.方法 构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率.结果 重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率.结论 通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变.
目的 構建過錶達SOS阻遏蛋白編碼基因lexA的大腸埃希菌菌株,研究SOS應答對恩諾沙星抗藥性突變的影響,併建立SOS應答抑製劑篩選平檯.方法 構建lexA重組錶達質粒pET-22b(+)-lexA,轉化大腸埃希菌BL21(DE3)構建重組質粒菌株BL21-lexA,用IPTG誘導BL21-lexA過錶達lexA,通過SDS-PAGE和Western blot鑒定LexA蛋白,用熒光定量PCR測定SOS應答基因recA和umuC錶達變化;然後用恩諾沙星梯度平闆測定恩諾沙星對BL21-unmodified(空質粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗藥性突變率.結果 重組質粒菌株BL21-lexA在IPTG誘導下過錶達LexA,抑製recA和umuC錶達,提高瞭大腸埃希菌對恩諾沙星的敏感性,降低瞭抗藥性突變率.結論 通過IPTG誘導BL21-lexA過錶達LexA蛋白,能構建穩定的SOS應答抑製模型,用于篩選SOS抑製劑,提高恩諾沙星殺菌力和降低抗藥性突變.
목적 구건과표체SOS조알단백편마기인lexA적대장애희균균주,연구SOS응답대은낙사성항약성돌변적영향,병건립SOS응답억제제사선평태.방법 구건lexA중조표체질립pET-22b(+)-lexA,전화대장애희균BL21(DE3)구건중조질립균주BL21-lexA,용IPTG유도BL21-lexA과표체lexA,통과SDS-PAGE화Western blot감정LexA단백,용형광정량PCR측정SOS응답기인recA화umuC표체변화;연후용은낙사성제도평판측정은낙사성대BL21-unmodified(공질립균주)화BL21-lexA적억균활성화항약성돌변솔.결과 중조질립균주BL21-lexA재IPTG유도하과표체LexA,억제recA화umuC표체,제고료대장애희균대은낙사성적민감성,강저료항약성돌변솔.결론 통과IPTG유도BL21-lexA과표체LexA단백,능구건은정적SOS응답억제모형,용우사선SOS억제제,제고은낙사성살균력화강저항약성돌변.
