广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2012年
4期
1-4
,共4页
赖桂华%余磊%张黎声%欧阳钧%邱小忠
賴桂華%餘磊%張黎聲%歐暘鈞%邱小忠
뢰계화%여뢰%장려성%구양균%구소충
Id2基因%C2C12细胞%转染%真核表达载体%大鼠
Id2基因%C2C12細胞%轉染%真覈錶達載體%大鼠
Id2기인%C2C12세포%전염%진핵표체재체%대서
目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,并观察外源性Id2基因C2C12细胞中的表达.方法:RT-PCR扩增出Id2全长cDNA,T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C2C12成肌细胞中.分别于转染4、8、12、24、36、72 h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况,并计算转染效率.结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2 cDNA片段,获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C2C12细胞,转染8h时,转染效率约为(10.5±2.8)％;转染12 h后,转染效率约为(20.9±3.1)％;转染24 h后,转染效率最高,约为(60.8±3.2)％.结论:成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体;并获得高表达外源性Id2基因的C2C12细胞.
目的:構建大鼠Id2基因真覈熒光錶達載體,併觀察外源性Id2基因C2C12細胞中的錶達.方法:RT-PCR擴增齣Id2全長cDNA,T4 DNA連接酶將載體pGEM-T和Id2 cDNA進行連接,構建剋隆載體,經限製性內切酶EcoR I酶切pGEM-Id2剋隆載體和pEGFP-C2真覈錶達載體,構建齣重組真覈錶達載體pEGFP-C2-Id2,經酶切分析、PCR鑒定及DNA測序證實cDNA片段大小和序列的正確性;通過電穿孔轉染法將外源性Id2基因導入C2C12成肌細胞中.分彆于轉染4、8、12、24、36、72 h後通過熒光倒置顯微鏡下觀察細胞整體情況,併計算轉染效率.結果:經酶切分析和序列測定證實pEGFP-C2-Id2含大小正確的正嚮Id2 cDNA片段,穫得高轉染率和高錶達外源性Id2基因的C2C12細胞,轉染8h時,轉染效率約為(10.5±2.8)％;轉染12 h後,轉染效率約為(20.9±3.1)％;轉染24 h後,轉染效率最高,約為(60.8±3.2)％.結論:成功構建瞭同時攜帶有G418篩選位點和Id2基因的真覈錶達載體;併穫得高錶達外源性Id2基因的C2C12細胞.
목적:구건대서Id2기인진핵형광표체재체,병관찰외원성Id2기인C2C12세포중적표체.방법:RT-PCR확증출Id2전장cDNA,T4 DNA련접매장재체pGEM-T화Id2 cDNA진행련접,구건극륭재체,경한제성내절매EcoR I매절pGEM-Id2극륭재체화pEGFP-C2진핵표체재체,구건출중조진핵표체재체pEGFP-C2-Id2,경매절분석、PCR감정급DNA측서증실cDNA편단대소화서렬적정학성;통과전천공전염법장외원성Id2기인도입C2C12성기세포중.분별우전염4、8、12、24、36、72 h후통과형광도치현미경하관찰세포정체정황,병계산전염효솔.결과:경매절분석화서렬측정증실pEGFP-C2-Id2함대소정학적정향Id2 cDNA편단,획득고전염솔화고표체외원성Id2기인적C2C12세포,전염8h시,전염효솔약위(10.5±2.8)％;전염12 h후,전염효솔약위(20.9±3.1)％;전염24 h후,전염효솔최고,약위(60.8±3.2)％.결론:성공구건료동시휴대유G418사선위점화Id2기인적진핵표체재체;병획득고표체외원성Id2기인적C2C12세포.
