华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
5期
589-592,602
,共5页
胡敏%张凯伦%项飞翔%潘铁成%魏翔%朱学海
鬍敏%張凱倫%項飛翔%潘鐵成%魏翔%硃學海
호민%장개륜%항비상%반철성%위상%주학해
超声造影剂%微泡%一氧气化氮合成酶基因%血管平滑肌细胞
超聲造影劑%微泡%一氧氣化氮閤成酶基因%血管平滑肌細胞
초성조영제%미포%일양기화담합성매기인%혈관평활기세포
目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的可行性.方法 实验分为A、B、C、D、E5组,分别为空白对照组、单纯质粒浸泡组、质粒+微泡造影剂组、质粒+超声辐照组、质粒+超声辐照+造影剂组.用重组真核表达载体pcDNA3.1- eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导转染体外培养的大鼠VSMCs,辐照条件为超声探头频率为10 MHz,机械指数为1.9,辐照时间为10 min,重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL.辐照48 h后,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化检测VSMCs内eNOSmRNA和蛋白的表达.结果 RT -PCR检测E组eNOS mRNA的表达最显著,积分吸光度(IA)比值为(91.11±3.41)％,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(26.10±1.32)％、(31.42±2.43)％、(35.05±2.25)％,与E组相比均P＜0.05.蛋白印迹分析eNOS蛋白表达,A组有极少量表达,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(22.12±1.33)％、(25.42±2.41)％、(33.11±3.11)％,而E组表达最明显,IA比值为(84.22±9.22)％,与各组相比均P＜0.05.结论 超声辐照结合微泡造影剂能显著提高eNOS基因在VSMCs的转染效率,提高细胞内一氧化氮合成酶的表达.
目的 探討微泡造影劑及超聲輻照介導內皮型一氧化氮閤成酶(eNOS)基因轉染體外培養大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)的可行性.方法 實驗分為A、B、C、D、E5組,分彆為空白對照組、單純質粒浸泡組、質粒+微泡造影劑組、質粒+超聲輻照組、質粒+超聲輻照+造影劑組.用重組真覈錶達載體pcDNA3.1- eNOS經微泡造影劑及超聲輻照介導轉染體外培養的大鼠VSMCs,輻照條件為超聲探頭頻率為10 MHz,機械指數為1.9,輻照時間為10 min,重組真覈細胞錶達載體pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL.輻照48 h後,採用RT-PCR、Western blot及免疫組化檢測VSMCs內eNOSmRNA和蛋白的錶達.結果 RT -PCR檢測E組eNOS mRNA的錶達最顯著,積分吸光度(IA)比值為(91.11±3.41)％,B、C、D組也有少量錶達,IA比值分彆為(26.10±1.32)％、(31.42±2.43)％、(35.05±2.25)％,與E組相比均P＜0.05.蛋白印跡分析eNOS蛋白錶達,A組有極少量錶達,B、C、D組也有少量錶達,IA比值分彆為(22.12±1.33)％、(25.42±2.41)％、(33.11±3.11)％,而E組錶達最明顯,IA比值為(84.22±9.22)％,與各組相比均P＜0.05.結論 超聲輻照結閤微泡造影劑能顯著提高eNOS基因在VSMCs的轉染效率,提高細胞內一氧化氮閤成酶的錶達.
목적 탐토미포조영제급초성복조개도내피형일양화담합성매(eNOS)기인전염체외배양대서혈관평활기세포(VSMCs)적가행성.방법 실험분위A、B、C、D、E5조,분별위공백대조조、단순질립침포조、질립+미포조영제조、질립+초성복조조、질립+초성복조+조영제조.용중조진핵표체재체pcDNA3.1- eNOS경미포조영제급초성복조개도전염체외배양적대서VSMCs,복조조건위초성탐두빈솔위10 MHz,궤계지수위1.9,복조시간위10 min,중조진핵세포표체재체pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL.복조48 h후,채용RT-PCR、Western blot급면역조화검측VSMCs내eNOSmRNA화단백적표체.결과 RT -PCR검측E조eNOS mRNA적표체최현저,적분흡광도(IA)비치위(91.11±3.41)％,B、C、D조야유소량표체,IA비치분별위(26.10±1.32)％、(31.42±2.43)％、(35.05±2.25)％,여E조상비균P＜0.05.단백인적분석eNOS단백표체,A조유겁소량표체,B、C、D조야유소량표체,IA비치분별위(22.12±1.33)％、(25.42±2.41)％、(33.11±3.11)％,이E조표체최명현,IA비치위(84.22±9.22)％,여각조상비균P＜0.05.결론 초성복조결합미포조영제능현저제고eNOS기인재VSMCs적전염효솔,제고세포내일양화담합성매적표체.
