实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2012年
5期
1-5
,共5页
陈军%王银%李慧玲%董建一%王福金%王爱国%王靖宇
陳軍%王銀%李慧玲%董建一%王福金%王愛國%王靖宇
진군%왕은%리혜령%동건일%왕복금%왕애국%왕정우
实时荧光定量PCR%相对定量%单标准曲线法%扩增效率
實時熒光定量PCR%相對定量%單標準麯線法%擴增效率
실시형광정량PCR%상대정량%단표준곡선법%확증효솔
目的 建立一种简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法.方法 采用严格一致的引物参数,对Fabp5、Ppar-α及β-Actin三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10倍梯度稀释后制作标准曲线.并以这三个标准曲线分别单独定量正常小鼠肝组织、H-ras12V转基因小鼠肝肿瘤周围组织和肿瘤组织中的Fabp5、Ppar-α和β-Actin的表达水平,以β-Actin为内参,分别采用双标准曲线法、2-ΔΔCt法和单标准曲线法对Fabp5和Ppar-α的表达进行相对定量分析.结果 单标准曲线法与双标准曲线法测定的Fabp5和Ppar-α差异性表达的相对定量值没有显著差异,而用2-ΔΔCt法获得的相对定量值与双标准曲线法相比,波动较大.结论 在引物参数严格一致的基础上,单标准曲线法是一种可行、简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法.
目的 建立一種簡便、高效的實時熒光PCR相對定量方法.方法 採用嚴格一緻的引物參數,對Fabp5、Ppar-α及β-Actin三箇基因分彆設計特異性擴增引物,製備相應的質粒標準品,10倍梯度稀釋後製作標準麯線.併以這三箇標準麯線分彆單獨定量正常小鼠肝組織、H-ras12V轉基因小鼠肝腫瘤週圍組織和腫瘤組織中的Fabp5、Ppar-α和β-Actin的錶達水平,以β-Actin為內參,分彆採用雙標準麯線法、2-ΔΔCt法和單標準麯線法對Fabp5和Ppar-α的錶達進行相對定量分析.結果 單標準麯線法與雙標準麯線法測定的Fabp5和Ppar-α差異性錶達的相對定量值沒有顯著差異,而用2-ΔΔCt法穫得的相對定量值與雙標準麯線法相比,波動較大.結論 在引物參數嚴格一緻的基礎上,單標準麯線法是一種可行、簡便、高效的實時熒光PCR相對定量方法.
목적 건립일충간편、고효적실시형광PCR상대정량방법.방법 채용엄격일치적인물삼수,대Fabp5、Ppar-α급β-Actin삼개기인분별설계특이성확증인물,제비상응적질립표준품,10배제도희석후제작표준곡선.병이저삼개표준곡선분별단독정량정상소서간조직、H-ras12V전기인소서간종류주위조직화종류조직중적Fabp5、Ppar-α화β-Actin적표체수평,이β-Actin위내삼,분별채용쌍표준곡선법、2-ΔΔCt법화단표준곡선법대Fabp5화Ppar-α적표체진행상대정량분석.결과 단표준곡선법여쌍표준곡선법측정적Fabp5화Ppar-α차이성표체적상대정량치몰유현저차이,이용2-ΔΔCt법획득적상대정량치여쌍표준곡선법상비,파동교대.결론 재인물삼수엄격일치적기출상,단표준곡선법시일충가행、간편、고효적실시형광PCR상대정량방법.
