广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2012年
5期
556-559
,共4页
吴亚安%邓丽芬%龚雨婷%陈端萍%谢端%肖承荣%蔡陈珣%赵晓蓉
吳亞安%鄧麗芬%龔雨婷%陳耑萍%謝耑%肖承榮%蔡陳珣%趙曉蓉
오아안%산려분%공우정%진단평%사단%초승영%채진순%조효용
肠道病毒71型%VP1%原核表达%纯化
腸道病毒71型%VP1%原覈錶達%純化
장도병독71형%VP1%원핵표체%순화
目的 分析重组肠道病毒71型外壳蛋白VP1 (EV71VP1)在大肠杆菌的表达及其部位,纯化重组蛋白VP1,为后续制备抗VP1单克隆抗体奠定基础.方法 采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP1在质粒转化菌BL21中的表达；用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blot分析VP1的表达形式和抗原性；优化EV71 VP1原核表达条件.结果 SDS-PAGE检测结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后的VP1为一单一条带,相对分子质量约36 000,与预期大小相符；Western blot检测证实该蛋白能分别与兔抗EV71外膜蛋白和兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性结合,其最佳表达条件为37℃,1.25 mmol/L IPTG诱导4h.结论 原核表达了EV71 VP1,经纯化复性后VP1具有良好的抗原性,为后续工作奠定了基础.
目的 分析重組腸道病毒71型外殼蛋白VP1 (EV71VP1)在大腸桿菌的錶達及其部位,純化重組蛋白VP1,為後續製備抗VP1單剋隆抗體奠定基礎.方法 採用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導VP1在質粒轉化菌BL21中的錶達；用Ni-NTA親和層析柱對重組蛋白進行純化,併用SDS-PAGE和Western blot分析VP1的錶達形式和抗原性；優化EV71 VP1原覈錶達條件.結果 SDS-PAGE檢測結果錶明重組蛋白主要以包涵體形式存在,純化後的VP1為一單一條帶,相對分子質量約36 000,與預期大小相符；Western blot檢測證實該蛋白能分彆與兔抗EV71外膜蛋白和兔抗His-tag多剋隆抗體髮生特異性結閤,其最佳錶達條件為37℃,1.25 mmol/L IPTG誘導4h.結論 原覈錶達瞭EV71 VP1,經純化複性後VP1具有良好的抗原性,為後續工作奠定瞭基礎.
목적 분석중조장도병독71형외각단백VP1 (EV71VP1)재대장간균적표체급기부위,순화중조단백VP1,위후속제비항VP1단극륭항체전정기출.방법 채용이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)유도VP1재질립전화균BL21중적표체；용Ni-NTA친화층석주대중조단백진행순화,병용SDS-PAGE화Western blot분석VP1적표체형식화항원성；우화EV71 VP1원핵표체조건.결과 SDS-PAGE검측결과표명중조단백주요이포함체형식존재,순화후적VP1위일단일조대,상대분자질량약36 000,여예기대소상부；Western blot검측증실해단백능분별여토항EV71외막단백화토항His-tag다극륭항체발생특이성결합,기최가표체조건위37℃,1.25 mmol/L IPTG유도4h.결론 원핵표체료EV71 VP1,경순화복성후VP1구유량호적항원성,위후속공작전정료기출.
