浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2012年
6期
874-878
,共5页
Shuffling%嵌合AAV%靶向%肝癌细胞
Shuffling%嵌閤AAV%靶嚮%肝癌細胞
Shuffling%감합AAV%파향%간암세포
采用Shuffling的方法,将AAV1-9 Cap基因序列进行改组,筛选出高效靶向肝癌细胞的嵌合AAV载体.以pAAV-MCS载体为骨架,构建出合AAV2 ITR和Rep2序列的pAdB载体,在此基础上,构建含有嵌合Cap序列的pARC载体库,用于转染293细胞,并加入5型腺病毒(Ad5),包装出嵌合AAV病毒.然后将包装出的嵌合AAV病毒与Ad5共感染BEL7402肝癌细胞,经过三轮筛选后,初步筛选出可以靶向肝癌细胞的嵌合AAV.最后将筛选出的AAV Rep2嵌合Cap基因的融合片段连接到pMD18-T载体上,构建出pARC-T载体,与AAV-EGFP质粒共转染293细胞,并加入Ad5,包装出病毒基因组合EGFP基因、病毒外壳为嵌合Cap的AAV病毒(cAAVEGFP),并用其感染BEL7402细胞,观察绿色荧光的表达.最后观察到绿色荧光表达,证明筛选出了靶向BEL7402肝癌细胞的嵌合AAV.
採用Shuffling的方法,將AAV1-9 Cap基因序列進行改組,篩選齣高效靶嚮肝癌細胞的嵌閤AAV載體.以pAAV-MCS載體為骨架,構建齣閤AAV2 ITR和Rep2序列的pAdB載體,在此基礎上,構建含有嵌閤Cap序列的pARC載體庫,用于轉染293細胞,併加入5型腺病毒(Ad5),包裝齣嵌閤AAV病毒.然後將包裝齣的嵌閤AAV病毒與Ad5共感染BEL7402肝癌細胞,經過三輪篩選後,初步篩選齣可以靶嚮肝癌細胞的嵌閤AAV.最後將篩選齣的AAV Rep2嵌閤Cap基因的融閤片段連接到pMD18-T載體上,構建齣pARC-T載體,與AAV-EGFP質粒共轉染293細胞,併加入Ad5,包裝齣病毒基因組閤EGFP基因、病毒外殼為嵌閤Cap的AAV病毒(cAAVEGFP),併用其感染BEL7402細胞,觀察綠色熒光的錶達.最後觀察到綠色熒光錶達,證明篩選齣瞭靶嚮BEL7402肝癌細胞的嵌閤AAV.
채용Shuffling적방법,장AAV1-9 Cap기인서렬진행개조,사선출고효파향간암세포적감합AAV재체.이pAAV-MCS재체위골가,구건출합AAV2 ITR화Rep2서렬적pAdB재체,재차기출상,구건함유감합Cap서렬적pARC재체고,용우전염293세포,병가입5형선병독(Ad5),포장출감합AAV병독.연후장포장출적감합AAV병독여Ad5공감염BEL7402간암세포,경과삼륜사선후,초보사선출가이파향간암세포적감합AAV.최후장사선출적AAV Rep2감합Cap기인적융합편단련접도pMD18-T재체상,구건출pARC-T재체,여AAV-EGFP질립공전염293세포,병가입Ad5,포장출병독기인조합EGFP기인、병독외각위감합Cap적AAV병독(cAAVEGFP),병용기감염BEL7402세포,관찰록색형광적표체.최후관찰도록색형광표체,증명사선출료파향BEL7402간암세포적감합AAV.
