中日友好医院学报
中日友好醫院學報
중일우호의원학보
CHINA-JAPAN FRIENDSHIP HOSPITAL
2012年
6期
343-347,封2
,共6页
赵婷婷%古艳婷%李平%朱斌%董晞%张浩军
趙婷婷%古豔婷%李平%硃斌%董晞%張浩軍
조정정%고염정%리평%주빈%동희%장호군
核心蛋白聚糖%自噬%微管相关蛋白轻链3%beclin1
覈心蛋白聚糖%自噬%微管相關蛋白輕鏈3%beclin1
핵심단백취당%자서%미관상관단백경련3%beclin1
目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响.方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1转录水平及翻译水平的表达.结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中.Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达.RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-Ⅱ的翻译水平均显著降低.结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础.
目的:構建人覈心蛋白聚糖(DCN)重組質粒,研究其對微管相關蛋白LC3和自噬基因beclin1錶達的影響.方法:從人胚肺二倍體成纖維細胞(2BS)提取總RNA,經RT-PCR穫得decorin的全長cDNA,剋隆至T-載體pUM-T併測序,亞剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1/V5-His,再次測序正確後以燐痠鈣共沉澱法瞬時轉染HEK293T細胞,利用RT-PCR、Western Blot方法檢測空載體組和重組質粒轉染組微管相關蛋白LC3和自噬基因beclin1轉錄水平及翻譯水平的錶達.結果:經DNA測序證實人DCN cDNA片段正確插入真覈錶達載體中.Western Blot結果顯示經燐痠鈣共沉澱法轉染的HEK 293T細胞中目的基因高錶達.RT-PCR和Western Blot結果顯示,與空載體組相比,重組質粒轉染組LC3轉錄水平顯著降低,beclin1和LC3-Ⅱ的翻譯水平均顯著降低.結論:成功構建人DCN重組質粒,其在HEK 293T中過錶達可以顯著降低微管相關蛋白LC3和自噬基因beclin1錶達,為進一步研究DCN與自噬的相互作用奠定瞭基礎.
목적:구건인핵심단백취당(DCN)중조질립,연구기대미관상관단백LC3화자서기인beclin1표체적영향.방법:종인배폐이배체성섬유세포(2BS)제취총RNA,경RT-PCR획득decorin적전장cDNA,극륭지T-재체pUM-T병측서,아극륭지진핵표체재체pcDNA3.1/V5-His,재차측서정학후이린산개공침정법순시전염HEK293T세포,이용RT-PCR、Western Blot방법검측공재체조화중조질립전염조미관상관단백LC3화자서기인beclin1전록수평급번역수평적표체.결과:경DNA측서증실인DCN cDNA편단정학삽입진핵표체재체중.Western Blot결과현시경린산개공침정법전염적HEK 293T세포중목적기인고표체.RT-PCR화Western Blot결과현시,여공재체조상비,중조질립전염조LC3전록수평현저강저,beclin1화LC3-Ⅱ적번역수평균현저강저.결론:성공구건인DCN중조질립,기재HEK 293T중과표체가이현저강저미관상관단백LC3화자서기인beclin1표체,위진일보연구DCN여자서적상호작용전정료기출.
