中国骨伤
中國骨傷
중국골상
CHINA JOURNAL OF ORTHOPAEDICS AND TRAUMATOLOGY
2012年
10期
842-845
,共4页
胡明%马远征%李大伟%黄凤山%杨达宇%杨同磊%刘玉川
鬍明%馬遠徵%李大偉%黃鳳山%楊達宇%楊同磊%劉玉川
호명%마원정%리대위%황봉산%양체우%양동뢰%류옥천
椎间盘%慢病毒属%膜蛋白质类%RNA干扰
椎間盤%慢病毒屬%膜蛋白質類%RNA榦擾
추간반%만병독속%막단백질류%RNA간우
目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台.方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA (small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚稚间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值.结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107 U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50％.半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Western blot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01.结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型.
目的:構建人胚椎間盤髓覈上皮膜蛋白-1基因低錶達細胞模型,為進一步研究EMP-1在椎間盤退變中的作用機製提供理想的研究平檯.方法:利用慢病毒載體介導的小髮夾狀RNA (small hairpin RNA,shRNA)轉入人胚胎腎細胞(293FT)包裝慢病毒,48 h後在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白錶達情況,72h後收集病毒上清併感染人胚稚間盤髓覈細胞,Western blot、RT-PCR鑒定基因榦擾效果,凝膠成像分析軟件對條帶顯色程度進行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值.結果:重組慢病毒滴度測定約為1×107 U/ml,感染靶細胞後得到EMP-1基因低錶達細胞模型,EMP-1mRNA錶達水平比正常細胞下降瞭50％.半定量RT-PCR結果顯示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Western blot結果顯示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01.結論:通過慢病毒包裝技術,成功構建人胚椎間盤髓覈上皮膜蛋白-1基因低錶達細胞模型.
목적:구건인배추간반수핵상피막단백-1기인저표체세포모형,위진일보연구EMP-1재추간반퇴변중적작용궤제제공이상적연구평태.방법:이용만병독재체개도적소발협상RNA (small hairpin RNA,shRNA)전입인배태신세포(293FT)포장만병독,48 h후재형광현미경하관찰록색형광단백표체정황,72h후수집병독상청병감염인배치간반수핵세포,Western blot、RT-PCR감정기인간우효과,응효성상분석연건대조대현색정도진행분석,득도EMP-1/GAPDH적평균치.결과:중조만병독적도측정약위1×107 U/ml,감염파세포후득도EMP-1기인저표체세포모형,EMP-1mRNA표체수평비정상세포하강료50％.반정량RT-PCR결과현시EMP1/GAPDH적평균치유0.46±0.03강지0.32±0.01,Western blot결과현시EMP1/GAPDH적평균치유0.50±0.01강지0.25±0.01.결론:통과만병독포장기술,성공구건인배추간반수핵상피막단백-1기인저표체세포모형.
