CAJ | 학술논문

猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的高度接触性传染病.TGEV的S、N基因具有重要的免疫学功能,构建S、N双基因疫苗将能提供更好的免疫效果.本研究用RT-PCR扩增S基因抗原区(2.1 kb,含A、B、C和D完整的抗原位点)和N基因编码区(1.2 kb),分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点(MCS),构建了单价质粒pVAXD-N和pVAXD-S,然后将N基因插入pVAXD-S中,构建了双启动子真核表达质粒pVAXD-N/S.将pVAXD-N/S与对照组(pVAXD-N、pVAXD-S和pVAXD)转染COS-7细胞进行表达鉴定,用RT-PCR可从pVAXD-N/S转染细胞中扩增出s、N两个目的基因,IFA鉴定结果显示,pvAXD-N/S可同时表达S、N两种目的蛋白.初步的小鼠(Mus musculus)免疫试验结果显示,pVAXD-N/S免疫小鼠后第14天即可检测到抗TGEV的IgG抗体,第35天抗体达最高峰,pVAXD-N/S诱导的抗体水平显著高于单基因质粒组pVAXD-N和pVAXD-S的抗体水平(P＞0.5),与混合质粒(pVAXD-N+pVAXD-S)诱导的抗体水平相当.本研究结果表明,构建的双启动子表达载体pV AXD-N/S具有S、N基因的双重免疫功能,为TGEV新型双基因疫苗研究提供了基础材料.
저전염성위장염(TGE)시유저전염성위장염병독(TGEV)인기적고도접촉성전염병.TGEV적S、N기인구유중요적면역학공능,구건S、N쌍기인역묘장능제공경호적면역효과.본연구용RT-PCR확증S기인항원구(2.1 kb,함A、B、C화D완정적항원위점)화N기인편마구(1.2 kb),분별정향삽입쌍계동자진핵표체재체pVAXD적다극륭위점(MCS),구건료단개질립pVAXD-N화pVAXD-S,연후장N기인삽입pVAXD-S중,구건료쌍계동자진핵표체질립pVAXD-N/S.장pVAXD-N/S여대조조(pVAXD-N、pVAXD-S화pVAXD)전염COS-7세포진행표체감정,용RT-PCR가종pVAXD-N/S전염세포중확증출s、N량개목적기인,IFA감정결과현시,pvAXD-N/S가동시표체S、N량충목적단백.초보적소서(Mus musculus)면역시험결과현시,pVAXD-N/S면역소서후제14천즉가검측도항TGEV적IgG항체,제35천항체체최고봉,pVAXD-N/S유도적항체수평현저고우단기인질립조pVAXD-N화pVAXD-S적항체수평(P＞0.5),여혼합질립(pVAXD-N+pVAXD-S)유도적항체수평상당.본연구결과표명,구건적쌍계동자표체재체pV AXD-N/S구유S、N기인적쌍중면역공능,위TGEV신형쌍기인역묘연구제공료기출재료.