CAJ | 학술논문

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害养猪业发展的传染病,为了PRRSV GP3-GP5(N-糖基化蛋白)-M(膜蛋白)融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性,本研究利用脂质体法将构建好的真核重组表达质粒pcDNA3.1-ORF3-ORF5-ORF6转染猪肾细胞(PK-15细胞),经G418(600 μg/mL)筛选(72 h)获得稳定表达PRRSV GP3-GP5-M融合蛋白的稳定细胞株.以RT-PCR分析目的基因转录；间接免疫荧光检测融合蛋白表达；Western blot和小鼠(Mus musculus)免疫试验检测融合蛋白免疫原性.结果表明,RT-PCR检测到3种目的基因的转录；间接免疫荧光检测到融合蛋白得以表达,Western blot检测到融合蛋白可与阳性猪血清发生特异性反应.小鼠免疫试验二免后S/P=样本/阳性对照的比率,达到1.80(S/P＞0.4为阳性),并且至少可以持续1个月.本研究成功实现了PRRSV GP3-GP5-M 融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达,证实PRRSV GP3-GP5-M融合蛋白具有良好的免疫原性,为PRRSV 多基因核酸疫苗研制提供了基础资料.
저번식여호흡종합정병독(PRRSV)시일충엄중위해양저업발전적전염병,위료PRRSV GP3-GP5(N-당기화단백)-M(막단백)융합단백재포유동물세포중적표체급기면역원성,본연구이용지질체법장구건호적진핵중조표체질립pcDNA3.1-ORF3-ORF5-ORF6전염저신세포(PK-15세포),경G418(600 μg/mL)사선(72 h)획득은정표체PRRSV GP3-GP5-M융합단백적은정세포주.이RT-PCR분석목적기인전록；간접면역형광검측융합단백표체；Western blot화소서(Mus musculus)면역시험검측융합단백면역원성.결과표명,RT-PCR검측도3충목적기인적전록；간접면역형광검측도융합단백득이표체,Western blot검측도융합단백가여양성저혈청발생특이성반응.소서면역시험이면후S/P=양본/양성대조적비솔,체도1.80(S/P＞0.4위양성),병차지소가이지속1개월.본연구성공실현료PRRSV GP3-GP5-M 융합단백재포유동물세포중적표체,증실PRRSV GP3-GP5-M융합단백구유량호적면역원성,위PRRSV 다기인핵산역묘연제제공료기출자료.