南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
10期
1383-1388
,共6页
丁道芳%王臻%徐浩%徐乐勤%梁倩倩%赵永见%施杞%王拥军
丁道芳%王臻%徐浩%徐樂勤%樑倩倩%趙永見%施杞%王擁軍
정도방%왕진%서호%서악근%량천천%조영견%시기%왕옹군
Igk-BMP4%免疫球蛋白κ链%过表达%诱导型干细胞%细胞分化
Igk-BMP4%免疫毬蛋白κ鏈%過錶達%誘導型榦細胞%細胞分化
Igk-BMP4%면역구단백κ련%과표체%유도형간세포%세포분화
bone morphogenetic protein 4%immunoglobulin kappa chains%over-expression%induced pluripotent stem cells%cell differentiation
目的 研究BMP4因子在诱导型干细胞(iPS细胞)培养过程中的作用和起作用的相关通路.方法 通过RT-PCR的方法从小鼠的胎盘组织中扩增BMP4成熟肽,并且在其N末端连接IgK分泌肽,此融合的片段克隆至pPYCAG载体上.重组质粒pPYCAG-IgK-BMP4转染至293T17细胞中并进行嘌呤霉素的筛选.通过细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定出表达BMP4的阳性克隆.为进一步检测上清中BMP4的生物活性,iPS细胞培养于含BMP4因子的细胞培养上清和LIF因子中,连续培养3代,并进一步观察细胞表型、三胚层细胞的分化潜能和多潜能相关基因的表达水平.结果 Smad1被分泌至上清中的BMP4磷酸化.当培养基中含BMP4同时加入LIF因子后,可以有效抑制iPS细胞分化.在此种方法培养3代后,不仅iPS细胞的表型可以有效维持,iPS细胞中多潜能相关的基因表达水平也未受到影响,同时这些iPS细胞仍具有向三个胚层分化的能力.结论 BMP4可高效表达在真核细胞中,有效地使培养iPS细胞保持其多向分化潜能.
目的 研究BMP4因子在誘導型榦細胞(iPS細胞)培養過程中的作用和起作用的相關通路.方法 通過RT-PCR的方法從小鼠的胎盤組織中擴增BMP4成熟肽,併且在其N末耑連接IgK分泌肽,此融閤的片段剋隆至pPYCAG載體上.重組質粒pPYCAG-IgK-BMP4轉染至293T17細胞中併進行嘌呤黴素的篩選.通過細胞免疫熒光和Western blot方法鑒定齣錶達BMP4的暘性剋隆.為進一步檢測上清中BMP4的生物活性,iPS細胞培養于含BMP4因子的細胞培養上清和LIF因子中,連續培養3代,併進一步觀察細胞錶型、三胚層細胞的分化潛能和多潛能相關基因的錶達水平.結果 Smad1被分泌至上清中的BMP4燐痠化.噹培養基中含BMP4同時加入LIF因子後,可以有效抑製iPS細胞分化.在此種方法培養3代後,不僅iPS細胞的錶型可以有效維持,iPS細胞中多潛能相關的基因錶達水平也未受到影響,同時這些iPS細胞仍具有嚮三箇胚層分化的能力.結論 BMP4可高效錶達在真覈細胞中,有效地使培養iPS細胞保持其多嚮分化潛能.
목적 연구BMP4인자재유도형간세포(iPS세포)배양과정중적작용화기작용적상관통로.방법 통과RT-PCR적방법종소서적태반조직중확증BMP4성숙태,병차재기N말단련접IgK분비태,차융합적편단극륭지pPYCAG재체상.중조질립pPYCAG-IgK-BMP4전염지293T17세포중병진행표령매소적사선.통과세포면역형광화Western blot방법감정출표체BMP4적양성극륭.위진일보검측상청중BMP4적생물활성,iPS세포배양우함BMP4인자적세포배양상청화LIF인자중,련속배양3대,병진일보관찰세포표형、삼배층세포적분화잠능화다잠능상관기인적표체수평.결과 Smad1피분비지상청중적BMP4린산화.당배양기중함BMP4동시가입LIF인자후,가이유효억제iPS세포분화.재차충방법배양3대후,불부iPS세포적표형가이유효유지,iPS세포중다잠능상관적기인표체수평야미수도영향,동시저사iPS세포잉구유향삼개배층분화적능력.결론 BMP4가고효표체재진핵세포중,유효지사배양iPS세포보지기다향분화잠능.
