畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
11期
1780-1787
,共8页
孙罗美%易林%邹年莉%柳萍%黄勇
孫囉美%易林%鄒年莉%柳萍%黃勇
손라미%역림%추년리%류평%황용
传染性支气管炎病毒%S1蛋白%表位串联%间接ELISA%建立
傳染性支氣管炎病毒%S1蛋白%錶位串聯%間接ELISA%建立
전염성지기관염병독%S1단백%표위천련%간접ELISA%건립
本研究旨在建立一种快速、简便的鸡传染性支气管炎抗体的检测方法.通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒(IBV) ZY3株的S1蛋白进行分析后,筛选出4段S1蛋白抗原表位优势区域(FI～F4),将4段表位串联成1条新基因F,对F基因编码的蛋白质进行二级结构预测·结果表明该蛋白抗原指数性高且具有良好的柔韧性.构建重组表达载体pET-32a(+)-F,并在原核表达系统中表达,获得大小为42 ku的融合蛋白,经Western blot 分析表明表达的串联蛋白具有良好的反应原性.以纯化的串联蛋白作为包被抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法.利用建立的ELISA方法对采集来175份血清样品进行检测,并与商品化试剂盒进行对比,显示其阳性符合率为90.2％,阴性符合率为85.7％,总体符合率为89.7％o,表明建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.
本研究旨在建立一種快速、簡便的鷄傳染性支氣管炎抗體的檢測方法.通過生物信息學軟件對傳染性支氣管炎病毒(IBV) ZY3株的S1蛋白進行分析後,篩選齣4段S1蛋白抗原錶位優勢區域(FI～F4),將4段錶位串聯成1條新基因F,對F基因編碼的蛋白質進行二級結構預測·結果錶明該蛋白抗原指數性高且具有良好的柔韌性.構建重組錶達載體pET-32a(+)-F,併在原覈錶達繫統中錶達,穫得大小為42 ku的融閤蛋白,經Western blot 分析錶明錶達的串聯蛋白具有良好的反應原性.以純化的串聯蛋白作為包被抗原,建立瞭一種檢測IBV抗體的間接ELISA方法.利用建立的ELISA方法對採集來175份血清樣品進行檢測,併與商品化試劑盒進行對比,顯示其暘性符閤率為90.2％,陰性符閤率為85.7％,總體符閤率為89.7％o,錶明建立的ELISA方法具有良好的特異性、重複性和敏感性.
본연구지재건립일충쾌속、간편적계전염성지기관염항체적검측방법.통과생물신식학연건대전염성지기관염병독(IBV) ZY3주적S1단백진행분석후,사선출4단S1단백항원표위우세구역(FI～F4),장4단표위천련성1조신기인F,대F기인편마적단백질진행이급결구예측·결과표명해단백항원지수성고차구유량호적유인성.구건중조표체재체pET-32a(+)-F,병재원핵표체계통중표체,획득대소위42 ku적융합단백,경Western blot 분석표명표체적천련단백구유량호적반응원성.이순화적천련단백작위포피항원,건립료일충검측IBV항체적간접ELISA방법.이용건립적ELISA방법대채집래175빈혈청양품진행검측,병여상품화시제합진행대비,현시기양성부합솔위90.2％,음성부합솔위85.7％,총체부합솔위89.7％o,표명건립적ELISA방법구유량호적특이성、중복성화민감성.
