畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
11期
1733-1739
,共7页
潘传英%陈宏%BISHOP E.Colin
潘傳英%陳宏%BISHOP E.Colin
반전영%진굉%BISHOP E.Colin
特定诱导因子%mRNA%重编程%诱导多潜能干细胞(iPS)
特定誘導因子%mRNA%重編程%誘導多潛能榦細胞(iPS)
특정유도인자%mRNA%중편정%유도다잠능간세포(iPS)
为利用特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40 T的体外转录mRNA实现安全的成纤维细胞重编程,本研究成功构建了特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40 T的mRNA体外转录载体,并对体外转录mRNA进行了5′和3 ′端加工修饰 ;进行了诱导因子mRNA的293和IMR90细胞转染试验,利用免疫细胞化学、免疫荧光和Real-Time PCR分别检测了Oct4、Sox2、SV40 T和Nanog的表达情况.结果显示,以上2种细胞以Oct4∶Sox2∶SV40 T=2∶1∶1的mRNA比例转染后均表达这3种特定诱导因子,且相应蛋白都正确地定位在细胞核上.转染细胞中Oct4和Nanog的表达都特异性地增高.结果提示,3种诱导因子的体外转录mRNA能够在体内协同作用,激活细胞内源性干性标志基因Nanog的表达,为开启重编程过程奠定了坚实的基础.
為利用特定誘導因子Oct4、Sox2和SV40 T的體外轉錄mRNA實現安全的成纖維細胞重編程,本研究成功構建瞭特定誘導因子Oct4、Sox2和SV40 T的mRNA體外轉錄載體,併對體外轉錄mRNA進行瞭5′和3 ′耑加工脩飾 ;進行瞭誘導因子mRNA的293和IMR90細胞轉染試驗,利用免疫細胞化學、免疫熒光和Real-Time PCR分彆檢測瞭Oct4、Sox2、SV40 T和Nanog的錶達情況.結果顯示,以上2種細胞以Oct4∶Sox2∶SV40 T=2∶1∶1的mRNA比例轉染後均錶達這3種特定誘導因子,且相應蛋白都正確地定位在細胞覈上.轉染細胞中Oct4和Nanog的錶達都特異性地增高.結果提示,3種誘導因子的體外轉錄mRNA能夠在體內協同作用,激活細胞內源性榦性標誌基因Nanog的錶達,為開啟重編程過程奠定瞭堅實的基礎.
위이용특정유도인자Oct4、Sox2화SV40 T적체외전록mRNA실현안전적성섬유세포중편정,본연구성공구건료특정유도인자Oct4、Sox2화SV40 T적mRNA체외전록재체,병대체외전록mRNA진행료5′화3 ′단가공수식 ;진행료유도인자mRNA적293화IMR90세포전염시험,이용면역세포화학、면역형광화Real-Time PCR분별검측료Oct4、Sox2、SV40 T화Nanog적표체정황.결과현시,이상2충세포이Oct4∶Sox2∶SV40 T=2∶1∶1적mRNA비례전염후균표체저3충특정유도인자,차상응단백도정학지정위재세포핵상.전염세포중Oct4화Nanog적표체도특이성지증고.결과제시,3충유도인자적체외전록mRNA능구재체내협동작용,격활세포내원성간성표지기인Nanog적표체,위개계중편정과정전정료견실적기출.
