基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
3期
350-355
,共6页
刘红%刘宾%和骁%赵晓涛
劉紅%劉賓%和驍%趙曉濤
류홍%류빈%화효%조효도
单纯疱疹病毒1型%糖蛋白D%主要抗原表位区%原核表达
單純皰疹病毒1型%糖蛋白D%主要抗原錶位區%原覈錶達
단순포진병독1형%당단백D%주요항원표위구%원핵표체
目的 原核表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原表位区,纯化融合表达蛋白并对其进行鉴定.方法 用Lasergene7.0中Protean软件对HSV-1 gD氨基酸序列进行抗原表位预测和分析,筛选出gD主要抗原表位区(gD MED),人工合成该区域cDNA序列,构建原核表达载体pET-GST-gD MED；将重组质粒转化大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3) pLysS,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过GST·Bind纯化试剂盒对gDMED融合蛋白进行纯化；Western blot对gD MED融合蛋白的免疫活性进行分析.结果 HSV-1 gD在266～394区域富含抗原表位,人工合成了该区域的cDNA序列,并成功构建了原核表达载体pET-GST-gD MED；gD MED融合蛋白主要以可溶形式表达,分子质量约为45 ku,纯度能达95％；Western blot结果显示,gD MED融合蛋白能与感染HSV-1患者的血清发生特异结合.结论 成功表达和纯化了具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融合蛋白,为HSV免疫诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制提供了依据.
目的 原覈錶達單純皰疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原錶位區,純化融閤錶達蛋白併對其進行鑒定.方法 用Lasergene7.0中Protean軟件對HSV-1 gD氨基痠序列進行抗原錶位預測和分析,篩選齣gD主要抗原錶位區(gD MED),人工閤成該區域cDNA序列,構建原覈錶達載體pET-GST-gD MED；將重組質粒轉化大腸桿菌(E.coli) BL21(DE3) pLysS,用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,通過GST·Bind純化試劑盒對gDMED融閤蛋白進行純化；Western blot對gD MED融閤蛋白的免疫活性進行分析.結果 HSV-1 gD在266～394區域富含抗原錶位,人工閤成瞭該區域的cDNA序列,併成功構建瞭原覈錶達載體pET-GST-gD MED；gD MED融閤蛋白主要以可溶形式錶達,分子質量約為45 ku,純度能達95％；Western blot結果顯示,gD MED融閤蛋白能與感染HSV-1患者的血清髮生特異結閤.結論 成功錶達和純化瞭具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融閤蛋白,為HSV免疫診斷試劑盒和基因工程疫苗的研製提供瞭依據.
목적 원핵표체단순포진병독1형(HSV-1)당단백D(gD)주요항원표위구,순화융합표체단백병대기진행감정.방법 용Lasergene7.0중Protean연건대HSV-1 gD안기산서렬진행항원표위예측화분석,사선출gD주요항원표위구(gD MED),인공합성해구역cDNA서렬,구건원핵표체재체pET-GST-gD MED；장중조질립전화대장간균(E.coli) BL21(DE3) pLysS,용이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)유도표체,통과GST·Bind순화시제합대gDMED융합단백진행순화；Western blot대gD MED융합단백적면역활성진행분석.결과 HSV-1 gD재266～394구역부함항원표위,인공합성료해구역적cDNA서렬,병성공구건료원핵표체재체pET-GST-gD MED；gD MED융합단백주요이가용형식표체,분자질량약위45 ku,순도능체95％；Western blot결과현시,gD MED융합단백능여감염HSV-1환자적혈청발생특이결합.결론 성공표체화순화료구유량호항원성적HSV-1 gD MED융합단백,위HSV면역진단시제합화기인공정역묘적연제제공료의거.
