基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
1期
77-81
,共5页
韩永卿%李容%高晋兰%缪时英%王琳芳
韓永卿%李容%高晉蘭%繆時英%王琳芳
한영경%리용%고진란%무시영%왕림방
精子发生%E3泛素连接酶%TRIM%RING finger
精子髮生%E3汎素連接酶%TRIM%RING finger
정자발생%E3범소련접매%TRIM%RING finger
目的 验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性.方法 把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性；另外构建了TRIM69基因的全长、RING结构域的点突变、以及RING结构域截短序列的真核细胞表达载体,瞬时转染293T细胞或稳定表达泛素的HeLa细胞株,通过免疫沉淀结合免疫印迹方法检测其是否具有催化多聚泛素链形成的活性.结果 泛素化分析实验表明TRIM69具有催化多聚泛素链形成的活性并且其活性依赖于它的RING结构域.结论 成功鉴定了人源TRIM69蛋白具有催化多聚泛素链形成的活性,为进一步证明其是一个新的E3泛素连接酶提供依据.
目的 驗證人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚汎素鏈形成的活性.方法 把人源TRIM69基因構建到原覈細胞錶達載體中,經過轉化、誘導、錶達和純化穫得TRIM69純化蛋白,通過細胞外汎素化實驗分析其是否具有催化多聚汎素鏈形成的活性；另外構建瞭TRIM69基因的全長、RING結構域的點突變、以及RING結構域截短序列的真覈細胞錶達載體,瞬時轉染293T細胞或穩定錶達汎素的HeLa細胞株,通過免疫沉澱結閤免疫印跡方法檢測其是否具有催化多聚汎素鏈形成的活性.結果 汎素化分析實驗錶明TRIM69具有催化多聚汎素鏈形成的活性併且其活性依賴于它的RING結構域.結論 成功鑒定瞭人源TRIM69蛋白具有催化多聚汎素鏈形成的活性,為進一步證明其是一箇新的E3汎素連接酶提供依據.
목적 험증인원TRIM69단백시부구유최화다취범소련형성적활성.방법 파인원TRIM69기인구건도원핵세포표체재체중,경과전화、유도、표체화순화획득TRIM69순화단백,통과세포외범소화실험분석기시부구유최화다취범소련형성적활성；령외구건료TRIM69기인적전장、RING결구역적점돌변、이급RING결구역절단서렬적진핵세포표체재체,순시전염293T세포혹은정표체범소적HeLa세포주,통과면역침정결합면역인적방법검측기시부구유최화다취범소련형성적활성.결과 범소화분석실험표명TRIM69구유최화다취범소련형성적활성병차기활성의뢰우타적RING결구역.결론 성공감정료인원TRIM69단백구유최화다취범소련형성적활성,위진일보증명기시일개신적E3범소련접매제공의거.
